小鼠宮頸原位癌模型的建立及PTD4-GFP對其透膜效應的研究.pdf

1、雞貧血病毒(chicken anemia virus,CAV)是一種類型獨特的環(huán)狀單鏈(負鏈)DNA病毒,它可編碼3種蛋白:VP1、VP2及VP3。而VP3(Apoptin,亦稱凋亡素)是功能蛋白,對正常二倍體細胞無殺傷作用,僅誘導具有致瘤表型細胞或轉化表型細胞的凋亡,因此VP3在腫瘤的生物治療上具有巨大的潛力和廣闊的前景。但VP3為大分子物質,不能自由穿透細胞膜,這點限制了其在生物治療上的應用。
　　1988年Green和Fra

2、nkel各自獨立發(fā)現(xiàn)HIV-TAT(human immunodeficiency virustrans-activator of transcription,HIV-TAT)蛋白具有穿透生物膜的能力,TAT蛋白具有生物穿透能力的區(qū)域稱為蛋白質轉導結構域(protein transduction domain,PTD),大量的研究表明PTD具有強大的運載潛能,它能攜帶生物大分子進入細胞內(nèi),并發(fā)揮生物學活性,而且沒有細胞選擇性。
　　

3、于是設想利用PTD強大的透膜效應,將VP3導入到腫瘤細胞中,誘導腫瘤細胞的凋亡,從而達到治療腫瘤的目的。本實驗室前期已經(jīng)對VP3在體外腫瘤細胞中的凋亡做了研究,VP3在體內(nèi)腫瘤中誘導凋亡的性質有待進一步研究。本課題擬以粘膜上皮類腫瘤宮頸癌為研究對象,初步探索VP3在體內(nèi)腫瘤中的特性,為以后VP3的生物治療奠定基礎。本實驗通過探索建立小鼠原位宮頸癌穩(wěn)定模型的方法及條件,并通過構建PTD4-GFP融合蛋白的原核表達載體,經(jīng)透膜實驗在激光共聚

4、焦顯微鏡下觀察PTD4介導的融合蛋白在體內(nèi)宮頸癌組織中的透膜效應,進一步驗證PTD4具有攜帶生物大分子進入腫瘤胞內(nèi)的透膜效應。結果顯示:直接將U14細胞注射到小鼠宮頸粘膜下,所得到的動物模型較穩(wěn)定;PTD4-GFP融合蛋白在3h后即可透過腫瘤組織進入到瘤體中。結論:直接將細胞懸液注射到小鼠宮頸粘膜下可得到穩(wěn)定的動物模型;PTD4能攜帶GFP蛋白穿透細胞膜,具有強大的轉運和透膜功能,為后期進一步研究VP3的凋亡機制及其抗腫瘤治療奠定了基礎