妊娠糖尿病孕婦血清Exosome中miRNA的表達譜分析.pdf

1、妊娠糖尿病(Gestational diabetes mellitus，GDM)是目前常見的妊娠期綜合征之一，主要癥狀出現(xiàn)在妊娠后期，臨床癥狀有孕婦體重過重，外陰、陰道假絲酵母菌感染反復發(fā)作等，妊娠糖尿病早期可以通過合理飲食和適當運動控制治療，但目前妊娠糖尿病篩查在孕中后期，致使患病孕婦沒有足夠時間介入治療，妊娠糖尿病早期診斷分子標記物的研究發(fā)現(xiàn)迫在眉睫。miRNA由于其高度穩(wěn)定性，物種間序列的保守性和表達的時空特異性，成為生物標記物的

2、研究熱點。miRNA是一種內(nèi)源性的非編碼RNA，通過與靶mRNA的3'端互補配對實現(xiàn)對基因的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控，研究發(fā)現(xiàn)某些miRNA的異常表達與妊娠糖尿病相關，但研究方法僅限于低密度芯片，定量PCR等，近年來發(fā)展起來的高通量測序技術由于數(shù)據(jù)量大，信息全面等特點在miRNA的研究中具有更大的優(yōu)勢。Exosome是在內(nèi)吞作用下由各種細胞釋放到細胞外基質(zhì)的直徑為40-100nm的膜泡結(jié)構，其中包裹了各類蛋白、RNA、脂質(zhì)體等?；贓xosome的膜

3、泡結(jié)構，Exosome中的miRNA更加穩(wěn)定，能夠更好的表征疾病的特征。鑒于以上背景我們對血清Exosome中的miRNA和血清中游離的miRNA進行了高通量測序研究，并且檢測分析了妊娠糖尿病孕婦與正常孕婦Exosomal miRNA的表達譜差異情況。該論文主要完成了如下研究內(nèi)容:
　　1、血清及其Exosome中miRNA的表達譜檢測分析:論文首先對血清中游離miRNA和Exosome中miRNA表達譜的進行了高通量測序分析，其

4、中Exosomal miRNA的測序結(jié)果比普通的血清miRNA測序結(jié)果更加豐富。血清Exosome中不但獲得了更多的miRNA種類;而且在高豐度miRNA的表達上，其表達水平更高;差異表達分析顯示除少數(shù)miRNA外，絕大多數(shù)miRNA在血清和血清exosome中沒有表現(xiàn)出顯著的差異。從中我們可以進一步證實血清中的miRNA在exosome中更加穩(wěn)定，exosomal miRNA能夠更好的表征樣本中的miRNA差異，可以作為潛在的生物標志

5、物進行研究與應用。
　　2、妊娠糖尿病孕婦血清Exosomal miRNA的差異表達分析:我們利用高通量測序技術對妊娠糖尿病孕婦和健康孕婦血清exosome中的miRNA進行了表達差異分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)有28種差異表達的miRNA，其中16種表達上調(diào)，12種表達下調(diào)，其中miR-19b-3p、miR-19a-3p、miR-16-5p、let-7f-5p、miR-18a-5p五種miRNA均為高豐度表達，而且差異極顯著。對他們進行靶基因

6、預測和功能富集分析結(jié)果顯示這些miRNA主要靶向INRS、IRS1/2、SOCS、P13k、ERK1/2，與Ⅱ型糖尿病信號通路、胰島素信號通路和血管內(nèi)皮生長信號通路密切相關，提示其與妊娠糖尿病的發(fā)生發(fā)展存在相關性，為妊娠糖尿病的診治提供了新的靶標分子。
　　3、結(jié)論:本論文在利用高通量測序血清及血清exosome miRNA進行檢測分析的基礎上，對妊娠糖尿病孕婦血清exosome miRNA進行了差異表達分析，獲得了一些差異表達的