玉米發(fā)育胚乳的酵母雙雜交cDNA文庫及誘餌載體的構建.pdf

1、玉米是主要的糧食、飼料作物和工業(yè)原料，在世界和我國農業(yè)生產上均具有重要的作用。我國在玉米的傳統育種方面已經取得了長足的進步。隨著植物分子生物學技術的發(fā)展，該技術在提高玉米的產量和品質等方面發(fā)揮著重要的作用。酵母雙雜交系統使該技術的應用更加便捷。應用酵母雙雜交系統可以很方便的研究蛋白質與蛋白質，蛋白質與RNA，蛋白質與小分子等的相互作用。而獲得高質量的cDNA文庫則是能否篩選到與其相互作用蛋白的前提。 利用SMART(switch

2、ing mechanism at 5’end of RNA transcript)技術，通過同源重組的方法，在酵母菌株AH109中構建玉米胚乳全長cDNA文庫。以胚乳mRNA為模板，反轉錄合成cDNA第一鏈。再在DNA聚合酶作用下，通過長距離PCR，擴增雙鏈cDNA(ds cDNA)。純化的ds cDNA與線性化pGADT7-Rec質粒載體共同轉化酵母菌株感受態(tài)AH109，經胞內同源重組形成環(huán)狀文庫質粒。應用營養(yǎng)缺陷的方法在SD/-Le

3、u平板上篩選并收集所有克隆從而獲得酵母雙雜交的玉米胚乳cDNA文庫。所獲得的文庫的轉化效率為1．8×10<'8>轉化子/3 μg pGADT7-Rec，從而在酵母菌株AH109成功構建了用于酵母雙雜交的玉米胚乳eDNA文庫。 淀粉不僅是食品的主要組成部分，還是一種重要的工業(yè)原料，因此改良淀粉品質一直都是遺傳育種的研究重點。淀粉合成酶(starch synthase，ss)對淀粉結構的形成起著非常重要的作用，因此對ss的深入研究有