玉米葉片cDNA文庫(kù)的構(gòu)建.pdf_第1頁(yè)
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1、山東大學(xué)碩士學(xué)位論文玉米葉片cDNA文庫(kù)的構(gòu)建姓名：王棟申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：張舉仁2000.5.1玉米葉片eDNA文庫(kù)的構(gòu)t壬棟摘要本工作通過酚氯仿一步法分離玉米葉片總RNA，紫外分光光度法測(cè)得ODm／OD：∞的比值為198接近200，電泳檢測(cè)顯示28S、18S條帶清晰，而且28S的亮度明顯大于18Sf利用mRNA5’端模板轉(zhuǎn)換技術(shù)＼(SMARTtheSwitchMechanismAtthe5’endofRNAT

2、emplates)合成eDNA的第一鏈，再經(jīng)3個(gè)循環(huán)的長(zhǎng)距離PcR(LDPCR)合成雙鏈eDNA并擴(kuò)增，雙鏈eDNA電泳檢測(cè)顯示，其拖影最長(zhǎng)端超出3kb。)雙鏈eDNA經(jīng)過Sfi(Aand13)酶切、過柱分級(jí)分離后連入載體^TriplEx2中，包裝后生成cDNA文庫(kù)。未擴(kuò)增文庫(kù)含有56105個(gè)獨(dú)立噬菌體克隆，擴(kuò)增以后的滴度為／10”pfu／ml。(經(jīng)過藍(lán)，白噬菌斑測(cè)得文庫(kù)的重組率為876％；隨機(jī)挑取lo＼、個(gè)克隆，PCR檢測(cè)cDNA片段

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