梨果實(shí)cDNA文庫(kù)的構(gòu)建.pdf

1、人類基因組計(jì)劃(HGP)的開展和實(shí)施,帶來了生物技術(shù)上的革命.一些相關(guān)的學(xué)科,例如生物信息學(xué)、比較基因組學(xué)、結(jié)構(gòu)基因組學(xué)、功能基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)應(yīng)運(yùn)而生.隨著人類和一些重要模式生物測(cè)序任務(wù)的相繼完成,其相應(yīng)的研究任務(wù)已經(jīng)由結(jié)構(gòu)基因組學(xué)研究轉(zhuǎn)向功能基因組學(xué)研究.梨基因組研究在人類基因組和其他一些模式植物基因組計(jì)劃的影響下,正在采用結(jié)構(gòu)和功能基因組研究并重的技術(shù)路線,不斷完善遺傳圖譜飽和密度的同時(shí),努力加強(qiáng)梨功能基因組學(xué)研究,為利用基因工

2、程技術(shù)進(jìn)行梨的遺傳改良,滿足人們?nèi)找嬖鲩L(zhǎng)的果品需求奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ).該試驗(yàn)通過吸光比值分析和凝膠電泳比較了改進(jìn)異硫氰酸胍法、熱硼酸法、改良CTAB法和Qiagen Rneasy試劑盒四種提取總RNA的方法提取梨果實(shí)組織總RNA的可行性.結(jié)果表明:改進(jìn)異硫氰酸胍法獲得的總RNA純度高、完整性好.其吸光比值的比值OD<,260>/OD<,280>在1.7~2.0之間,OD<,260>/OD<,230>大于2.電泳檢測(cè)顯示28S、1 8SrRN

3、A條帶清晰,且28S亮度明顯大于18S.其它方法提取的總RNA吸光比值OD<,260>/OD<,280>均小于1.7,OD<,260>/OD<,230>均小于2.0.說明產(chǎn)物中有不同程度的多糖、多酚和蛋白的污染.利用M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶把總RNA中的mRNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA,并合成雙鏈cDNA.然后用SPIN-400Column對(duì)cDNA進(jìn)行分級(jí)分離,去除小于500bp的cDNA片段.在雙連cDNA兩端加上接頭,與載體λ gt11連接,用