胰腺癌細胞來源的exosomes的提取、鑒定及體內分布的初步研究.pdf

1、目的:證實體外培養(yǎng)的胰腺癌細胞可分泌exosomes，初步分析胰腺癌來源的exosomes在小鼠全身分布情況。
　　方法:1、對不同轉移潛能的胰腺癌細胞株panc-02，panc-02-H7進行體外培養(yǎng)，收集上清液，采用差速離心聯(lián)合蔗糖梯度離心法提取純化exosomes，通過BCA蛋白質定量法對exosome進行間接定量。并在電鏡下使用液相載網法，觀察exosomes的形態(tài)，以及用Western Blot對其分子標志物進行鑒定。2

2、、利用共聚焦熒光成像技術，觀察PKH67綠色熒光標記的exosomes在小鼠各個主要臟器的分布情況。
　　結果:1、不同肝轉移潛能的胰腺癌細胞株panc-02，panc-02-H7均可以產生exosomes。通過電鏡觀察發(fā)現，兩種exosomes在形態(tài)上并沒有明顯差異，均呈現為圓形或橢圓形的囊泡狀結構，大小較為均一，直徑大多集中在50～150nm之間。Western Blot顯示，兩種exosomes都表達exosomes特異性分

3、子標志蛋白，CD9、MHC-Ⅰ、TSG101，卻不含凋亡小體蛋白Cytochrome C。電鏡形態(tài)學鑒定和Western Blot分子標志物鑒定兩者符合性良好。BCA蛋白質定量是較為簡便的exosomes的定量方法，并且結果顯示等量細胞來源的exosomes的蛋白含量，高肝轉移潛能的panc-02-H7高于panc-02(P＜0.05)。2、通過共聚焦觀察，在小鼠肺、肝、脾、骨髓和腦中能明顯的觀察到有綠色熒光標記的exosomes分布，