結(jié)核分支桿菌特異的PE-PPE蛋白應(yīng)用于結(jié)核病血清學(xué)診斷的初步研究.pdf

1、結(jié)核病是一種主要的呼吸系統(tǒng)傳染病。早期診斷以及規(guī)范的多藥物聯(lián)合的化學(xué)治療是主要的控制策略。改良的診斷試劑對于檢測結(jié)核分支桿菌感染是必須的，研究新的血清學(xué)診斷方法是對現(xiàn)有診斷方法的一個有力補充。 最近已經(jīng)證明由結(jié)核分支桿菌RDl(一個9.5-Kb的DNA片段)區(qū)基因編碼的蛋白在細菌毒力、疫苗發(fā)展和診斷試劑設(shè)計等方面具有重要作用。比較基因組學(xué)和生物信息學(xué)表明除了RDl，還有11個基因組區(qū)域在M.tuberculosis中保守存在，而

2、在BCG疫苗株中是缺失的。這些缺失區(qū)包括了M.tuberculosisH37Rv108個ORFs，在目前世界不同地區(qū)用作抗結(jié)核疫苗的所有13個BCG疫苗亞株中都是缺失的。最近已經(jīng)有不少研究證明，RDl區(qū)和其他的RD區(qū)編碼的蛋白具有發(fā)展成為疫苗和診斷試劑的潛力。M.tuberculosis基因組中大約有10﹪的ORFs編碼了PE和PPE家族蛋白，它們是富含甘氨酸且M.tuberculosis特有的蛋白，由于PE/PPE家族蛋白在序列和可能

3、結(jié)構(gòu)上的獨特性，推測它們有可能具有比較重要的免疫學(xué)意義，這方面的研究目前還不是太多。不過，現(xiàn)在已經(jīng)有了一些關(guān)于在臨床方面定性定量研究PE/PPE蛋白的免疫反應(yīng)的報道。 本項研究的目的是為了確認新的結(jié)核病血清學(xué)診斷抗原，我們擬對在M.tuberculosis中保守存在，而在BCG中缺失的PE/PPE家族成員-Rv3425，Rv3426，Rv3429，Rv2352c，Rv2353c，Rv3621c和Rv3622c的免疫學(xué)特性進行評估

4、，并且將它們與人們熟知的兩個抗原，ESAT-6和CFP-10相比較。以體外培養(yǎng)的M.tuberculosisH37Rv提取的RNA為模板的RT-PCR實驗證明在轉(zhuǎn)錄水平上可以表達的基因有Rv3425，Rv3426，Rv3429，Rv2353c，這也預(yù)示著它們有可能是在體外指數(shù)生長期表達的功能活躍的基因。我們成功地在E.coli中克隆表達純化了重組蛋白Rv3425，Rv3429，Rv2353c，CFP-10和ESAT-6。并用這些抗原來檢

5、測針對結(jié)核病人血清以及接種BCG的健康對照者(n=28)血清的抗體反應(yīng)。結(jié)核病人血清包括肺結(jié)核病人的血清(n=50)和肺外結(jié)核病人的血清(n=32)。 我們檢測了三個PPE重組蛋白，Rv3425，Rv3429，Rv2353c和兩個對照抗原CFP-10，ESAT-6在識別結(jié)核病人和健康對照者血清中IgG抗體的反應(yīng)。五種抗原檢測肺結(jié)核病人血清IgG反應(yīng)的敏感性分別為70.0﹪，22.0﹪，16.0﹪，78.0﹪和36.0﹪，檢測肺外

6、結(jié)核病人中的血清IgG反應(yīng)的敏感性分別為59.4﹪，18.8﹪，12.5﹪，65.6﹪和34.4﹪，與接種過BCG疫苗的健康對照者相比較，五種抗原檢測結(jié)核病人的特異性分別為100﹪，96.4﹪，96.4﹪，96.4﹪和100﹪?？梢钥闯?，雖然五種抗原的特異性均比較高，可是在檢測結(jié)核病人的敏感性方面，也只有重組Rv3425蛋白抗原與CFP-10(Rv3874)相當(dāng)。如果我們將重組蛋白Rv3425，CFP-10和ESAT-6的血清學(xué)檢測結(jié)果

7、合并在一起考慮，檢測肺結(jié)核和肺外結(jié)核病人的敏感性分別可以上升到82﹪和68.8﹪，特異性為96.4﹪。 我們還檢測了重組蛋白Rv3425，CFP-10和ESAT-6的IgM抗體反應(yīng)，檢測肺結(jié)核和肺外結(jié)核病人的敏感性分別為32.0﹪，74.0﹪，78.0﹪和29.0﹪，64.5﹪，61.3﹪，特異性分別為100﹪，96.4﹪，96.4﹪。如果將三個抗原的檢測結(jié)果合并在一起考慮，檢測肺結(jié)核和肺外結(jié)核病人的敏感性分別可以上升到88﹪和

8、68.8﹪，特異性為96.4﹪。 從研究中我們可以發(fā)現(xiàn)，重組Rv3425、CFP-10和ESAT-6蛋白針對接種BCG的健康對照者和結(jié)核病人的血清學(xué)反應(yīng)具有顯著的差異(p＜0.0001)，而且我們還發(fā)現(xiàn)重組Rv3425蛋白抗IgG的抗體反應(yīng)強度基本上同CFP-10等同，并且高于ESAT-6。證明了M.tuberculosisRv3425具有免疫敏感性和免疫特異性的本質(zhì)，有希望用于結(jié)核病人的血清學(xué)診斷，這在以前是沒有報道過的。