結(jié)核分枝桿菌特異性重組抗原在結(jié)核病血清學診斷中的研究.pdf

1、目的:建立規(guī)范的結(jié)核分枝桿菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)特異性抗原重組蛋白Mtb8.4、38KD、MPT64和MPT63酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linkedimmunosorbent assay，ELISA)檢測系統(tǒng)。用建立的檢測系統(tǒng)檢測結(jié)核病(tuberculosis,TB)患者血清，以確定MTB特異性抗原重組蛋白檢測的靈敏度和特異性，試圖提高結(jié)核病的臨床實驗室診斷水平。 方法:采用

2、方陣法和ROC(Receiver Operating Characteristic)曲線法確定MTB特異性抗原重組蛋白Mtb8.4、38KD、MPT64和MPT63酶聯(lián)免疫吸附試驗最佳抗原包被濃度和酶標二抗?jié)舛?，以ROC曲線法確定四種抗原蛋白ELISA法檢測的“陽性判斷”值(cut-off值)，建立起規(guī)范的ELISA檢測系統(tǒng)。用已建立的四種抗原蛋白ELISA檢測系統(tǒng)檢測臨床收集到的標本，以ROC曲線法確定四種抗原蛋白的靈敏度及特異性值。

3、對同一批血清標本進行結(jié)核抗體檢測。將四種重組特異性抗原聯(lián)合組與痰涂片組、結(jié)核抗體組的靈敏度及特異性值進行比較，并對組間差異進行統(tǒng)計學分析。 結(jié)果: 1．MTB特異性抗原重組蛋白Mtb8.4、38KD、MPT64和MPT63 ELISA檢測系統(tǒng)的抗原包被濃度和酶標二抗?jié)舛确謩e在1∶32000和1∶1000；1∶64000和1∶1000；1∶64000和1∶1000以及1∶128000和1∶1000時為最佳。 2．M

4、tb8.4、38KD、MPT64和MPT63四種特異性抗原檢測其各自相應的抗體，靈敏度和特異性分別是47.60﹪和93﹪、59.60﹪和92.30﹪、68.00﹪和92.30﹪以及70.41﹪和87.25﹪，特異性抗原聯(lián)合組檢測的靈敏度和特異性為82.4﹪和88.3﹪。痰涂片組和結(jié)核抗體組檢測結(jié)核病的靈敏度分別是42.2﹪和51.9﹪，結(jié)核抗體組特異性是81.8﹪。Mtb8.4蛋白與38KD蛋白和MPT63蛋白呈正的線性相關，MPT64

5、蛋白與38KD蛋白呈正的線性相關，四種抗原之間雖然存在一定的相關性，但是不能相互替代，四種抗原相互補充的方法檢測結(jié)核病的檢測效果最為理想。 3．特異性抗原聯(lián)合組與經(jīng)典的抗酸染色法(痰涂片組)和目前臨床推廣使用的結(jié)核抗體檢測法(結(jié)核抗體組)相比，檢測結(jié)核病均顯示有統(tǒng)計學差異。特異性抗原聯(lián)合組檢測結(jié)核桿菌的靈敏度和特異性優(yōu)于目前臨床推廣使用的結(jié)核抗體檢測法(結(jié)核抗體組)。靈敏度顯著優(yōu)于經(jīng)典的抗酸染色法(痰涂片組)。 4．結(jié)核

6、病病人的病程與Mtb8.4蛋白和38KD蛋白，呈正的線性相關。白細胞(粒細胞)與38KD蛋白，呈正的線性相關。血清白蛋白與38KD蛋白存在負的線性相關關系。 結(jié)論: 1．建立了MTB特異性蛋白Mtb8.4、38KD、MPT64和MPT63規(guī)范化的ELISA檢測系統(tǒng)。 2．用方陣法和ROC曲線獲得特異性抗原重組蛋白的最佳抗原包被濃度和酶標二抗?jié)舛?，是建立?guī)范化的EUSA檢測系統(tǒng)的關鍵環(huán)節(jié)。 3．四種抗原之間

7、雖然存在一定的相關性，但是不能相互替代，四種特異性抗原聯(lián)合相互補充的方法檢測結(jié)核病的檢測效果最為理想。特異性抗原聯(lián)合組無論與經(jīng)典的抗酸染色法(痰涂片組)相比還是與目前臨床推廣使用的結(jié)核抗體檢測法(結(jié)核抗體組)相比，檢測結(jié)核病均顯示有統(tǒng)計學差異。特異性抗原聯(lián)合組檢測結(jié)核桿菌的靈敏度和特異性優(yōu)于目前臨床推廣使用的結(jié)核抗體檢測法(結(jié)核抗體組)。靈敏度顯著優(yōu)于經(jīng)典的抗酸染色法(痰涂片組)。 4．Mtb8.4蛋白和38KD蛋白抗原相應的抗