核因子Kb受體活化因子及其配體在糖尿病大鼠腎臟中的表達及氯化鋰的防治作用.pdf

1、目的：1.通過檢測糖尿病腎病(DN)大鼠模型腎組織中RANK-RANKL表達來探討其在DN發(fā)生發(fā)展過程中的意義。2.研究氯化鋰對糖尿病腎病大鼠模型腎組織中RANK/RANKL表達水平的影響，探討其治療糖尿病腎病的可行性及相關機制。
　　方法：清潔級SD雄性大鼠24只，稱重，隨機分成3組：正常組(Z組)、模型組(M組)、治療組(L組)，M組、L組大鼠予以大劑量鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射造1型糖尿病模型，Z組以等量檸檬酸-檸檬酸三鈉

2、緩沖液注射。以腹腔注射72小時后隨機血糖值≥16.65mmol/L作為造模成功的判定標準。造模10周后以24小時尿蛋白定量≥30mg或超過Z組尿蛋白的10倍，作為糖尿病腎病成模的標準。對L組大鼠腹腔注射氯化鋰15mg/kg，予Z組、M組大鼠等量生理鹽水腹腔注射，觀察用藥后的相關指標。檢測血糖、24小時尿微量白蛋白，留存大鼠腎組織標本，HE染色觀察各組大鼠腎組織病理變化，免疫組化觀察并檢測RANK/RANKL表達水平，實時定量PCR檢測各

3、組大鼠RANK mRNA的表達。
　　結果：
　　1.實驗過程中，造模大鼠中1只未達到糖尿病模型標準，模型成功率為93.8％（15/16）。共死亡4只，死亡率16.7%。
　　2.一般指標觀察：
　　體重：4周、10周時(造模后第4周、第10周末) M組、L組大鼠體重低于正常組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；12周時(治療后第2周)，模型組M、治療組L大鼠體重較正常組Z組大鼠明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0

4、.05)，治療組L大鼠體重高于模型組M，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　血糖：4周、10周及12周 M組、L組大鼠血糖均明顯高于Z組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；但M組、L組大鼠之間血糖無顯著性差異(P>0.05)。
　　24小時尿微量白蛋白：4周時糖尿病腎病模型成功，M組、L組大鼠尿蛋白水平高于Z組，有顯著性差異(P<0.05)；10周時，M組、L組大鼠尿蛋白水平明顯高于Z組，有顯著性差異(P<0.05)；M

5、組、L組之間差異無顯著性(P>0.05)。12周M組、L組大鼠尿蛋白水平高于Z組，有顯著性差異(P<0.05)；L組尿蛋白水平低于M組，有顯著性差異(P<0.05)。
　　3.組織病理學觀察：M組大鼠腎組織表現(xiàn)為腎小球肥大，系膜基質增多，基底膜增厚，腎小動脈硬化；小管基底膜增厚，管腔狹窄、閉塞，間質水腫、纖維化等變化。L組大鼠毛細血管基底膜輕度增厚，系膜基質增多，但較M組有所減輕，腎小管水腫減輕，管腔狹窄程度較M組減輕。
　

6、　4.免疫組化：Z組RANK-RANKL的少量表達，M組部分腎小球和腎小管中可見有RANK-RANKL明顯表達，較同期Z組表達明顯升高，有顯著性差異(P<0.05)，L組RANK-RANKL的表達較M組下降，有顯著性差異(P<0.05),但仍高于Z組。
　　5.實時定量PCR：M組、L組大鼠腎組織RANK mRA的表達明顯高于Z組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；L組大鼠腎組織RANK mRA的表達較M組下降，差異有統(tǒng)計學意義(