小鼠核因子κB受體活化因子配基（RANKL）胞外段cDNA在大腸桿菌中的表達(dá).pdf

1、目的：克隆小鼠核因子-κB受體活化因子配基(receptoractivatorofnuclearfactorκBligand，RANKL)胞外段cDNA并在大腸桿菌中表達(dá)純化。分析重組蛋白的生物活性。 方法：從小鼠脾組織中分離總RNA，采用RT-PCR方法獲得小鼠cDNA，以其為模板，利用PCR方法分兩步擴(kuò)增出RANKL胞外段基因編碼序列，克隆入pGEM(R)-TEasy載體，并進(jìn)行DNA序列分析。然后將目的片段插入融合型原核表

2、達(dá)載體pGEX-2T中，重組表達(dá)質(zhì)粒pGEX-2T/RANKL轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21中誘導(dǎo)表達(dá)，聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定可見大約40KD蛋白條帶。經(jīng)優(yōu)化表達(dá)條件后，Westernblotting進(jìn)一步鑒定該融合蛋白。目的蛋白含GST純化標(biāo)簽，利用GlutathioneSepharose4B親和層析純化。采用體外破骨細(xì)胞樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)分析重組蛋白生物活性。 結(jié)果：獲得了小鼠RANKL胞外段cDNA，并成功構(gòu)建了高效原核表達(dá)質(zhì)粒p