脊髓性肌萎縮癥SMN基因檢測(cè)及其表達(dá)的研究.pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文脊髓性肌萎縮癥SMN基因檢測(cè)及其表達(dá)的研究姓名：盧麗萍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：兒科學(xué)指導(dǎo)教師：麻宏偉20050401( 玉亟函脊髓性肌萎縮癥S M N 基因檢測(cè)及其表達(dá)的研究目 的脊髓性肌萎縮( s p i n a l m u s c u l a ra t r o p h y ，S M A ) 是以脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元退化變性為特征，臨床表現(xiàn)為進(jìn)行性、對(duì)稱性肢體近端和軀干肌肉萎縮、無(wú)力和癱瘓的一種常染色體隱性遺傳病

2、。發(fā)病率約1 ／1 0 0 0 0 。根據(jù)其發(fā)病年齡及嚴(yán)重程度在臨床上將其分為三種類型( I —l I l 型) ：I 型( W e r d n i n g —H o f f m a n n 病) 是最嚴(yán)重型，一般6 個(gè)月之內(nèi)發(fā)病，不能坐，通常在2 歲之內(nèi)死亡。I I 型( 中間型) ：常在1 8 個(gè)月前發(fā)病，無(wú)獨(dú)立行走能力，其存活時(shí)間2年以上。I I I 型( K u g e l b e r g —W e l a n d e r 病)

3、 一般在1 8 個(gè)月之后發(fā)病，能獨(dú)立行走，但行走無(wú)力。S M A 致病基因定位于染色體5 q 1 1 ．2 ～5 q1 3 ．3 區(qū)域。該區(qū)域的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元生存基因( s u r v i v a lm o t o rn e u r o n ，S M N ) 為S M A 的決定性基因。該基因存在兩個(gè)高度同源的拷貝，端?？截? S M N l ) 和著絲?？截? S M N 2 ) 。9 6 ％的S M A 患者有S M N I 基因外顯子

4、7 的純合缺失或突變舊1 。以往根據(jù)S M N I 和S M N 2 之間的核苷酸差異和患者S M N I 基因外顯子7 或8 純合缺失，多采用限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)( R e s t r i c t i o nf r a g m e n tl e n g t hp o l y m o r p h i s m ，R F L P ) 、單鏈構(gòu)象多態(tài)性( s i n g l es t r a n dc o n f o r m a t i o n

5、p o l y m o r -p h i s m ，s s c P ) 等方法進(jìn)行S M A 基因診斷。但上述方法需費(fèi)用高、操作繁雜、耗時(shí)長(zhǎng)，所以有必要探討更為簡(jiǎn)便、快速的S M A 基因診斷方法。為此本研究第一部分建立了檢測(cè)單堿基突變的等位基因特異性擴(kuò)增A S —P C R ( A l —l e l e —S p e c i f i cA m p l i f i c a t i o n ) 方法，用以檢測(cè)S M N I 基因外顯子7

6、缺失。由于正常人群中有1 ／4 0 —1 ／6 0 攜帶S M N l 基因缺失，所以對(duì)于S M A 攜帶者的檢測(cè)在遺傳咨詢中尤為重要。但A S —P C R 法與以往定性P c R —R F L P 等方法一樣均不能將正常人與S M A 攜帶者區(qū)分開(kāi)。為此本研究第二部分應(yīng)用T a q M a n 技術(shù)并采用M G B ( m i n o r g r o o v eb i n d e r ，M G B ) 探針建立了定量檢測(cè)S M N