基于不同層次的復方鱉甲軟肝片藥效物質(zhì)辨識及相關問題探討.pdf

1、藥效物質(zhì)辨識是中藥現(xiàn)代化研究的年要基石。客觀辨識中藥藥效組分，對于闡明藥效作用機制，提高中藥質(zhì)量控制水平，保障臨床有效性和安全性提供重要的科學依據(jù)和技術支撐，同時也為現(xiàn)代組分中藥的開發(fā)奠定堅實的基礎。由于中藥復方本身的復雜性、研究方法的局限性，中藥復方的藥效物質(zhì)辨識尚未取得實質(zhì)性突破。
　　為尋求中藥藥效物質(zhì)辨識瓶頸的新突破，本課題以臨床首選治療肝纖維化藥物——復方鱉甲軟肝片為模式藥，探索建立新途徑：借鑒血清藥物化學的思路，逐次檢

2、測體外樣本、動物以及臨床標本中的藥源性成分，通過對比分析三者異同，初步確定能代表藥效的目標成分。在此基礎上，嘗試構建一種基于“體外—動物—人體”層層遞進、面向臨床的藥效物質(zhì)篩選模式，旨在多快好省地尋找和確定中藥藥效物質(zhì)。主要結果與結論如下：
　?。ㄒ唬楸碚鲝头谨M甲軟肝片體外成分，建立其體外成分分析方法：采用HPLC法表征了人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、芍藥苷、連翹苷和阿魏酸等成分；采用UPLC-Q-TOF/MS法，共表征了可能

3、存在的38種化合物，包括：三萜皂苷類（如人參皂苷、黃芪皂苷）、單萜類（如芍藥苷類）、黃酮類（如芒柄花素）、苯乙醇苷類（連翹酯苷）、揮發(fā)油（如洋川芎內(nèi)酯）、有機酸（如沒食子酸）等。為復方鱉甲軟肝片的藥效物質(zhì)的篩選、質(zhì)量控制方法的建立、藥效作用機制的闡明等后續(xù)研究奠定基礎。
　?。ǘ檫M一步篩選藥效物質(zhì)，前期研究在大鼠含藥標本中檢得人參皂苷類、三七皂苷、芍藥苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素等13種原型成分；繼而借鑒代謝組學思路，采用UPLC

4、-Q-TOF/MS法，針對正常大鼠與肝纖維化模型大鼠含藥血漿進行整體對比研究，同時基于GC/TOF-MS技術對二者內(nèi)源性代謝產(chǎn)物作了差異分析。PCA分析的得分圖顯示，兩組大鼠血漿中代謝物組能得以區(qū)分，提示藥源性成分在二者體內(nèi)的吸收、分布、代謝等過程存在差異，導致所篩選得出的藥效物質(zhì)也會存在差異。
　?。ㄈ橛行П苊鈴捏w外到體內(nèi)，從動物到人體的種屬差異障礙，更加科學準確地辨識藥效物質(zhì)，本研究結合UPLC-TOF/MS與MS/MS法

5、對人體正常劑量服藥后所采集的血液與尿液樣本進行初步檢測，結果顯示，只檢測到了芍藥苷、芒柄花素、毛蕊異黃酮葡萄糖苷幾種成分。反觀用藥劑量、樣品處理方式、檢測分析手段等多方面因素，揭示現(xiàn)今血清藥化研究模式對于人體樣本的適用性問題，有待更進一步開展全面、深入的研究。
　　縱觀以上結果發(fā)現(xiàn)：（1）所測得成分從體外、動物到人體依次減少，提示體外和動物層次所含有的成分不一定是復方鱉甲軟肝片抗人體肝纖維化的藥效物質(zhì)；（2）正常/模型大鼠含藥血漿

6、的差異提示更應關注基于模型動物的藥效物質(zhì)的篩選；（3）臨床樣本的分析存在給藥劑量、樣品處理方法等問題；以上現(xiàn)象顯示了現(xiàn)今中藥血清藥物化學應用于藥效物質(zhì)辨識存在的臨床相關性、可行性與普適性等局限，本文嘗試對其一一進行了探討。
　　綜上所述，本文通過“體外—動物—人體”三位一體的藥效物質(zhì)篩選途徑，初步闡釋了復方鱉甲軟肝片可能的藥效物質(zhì)，從而為最終形成中藥藥效物質(zhì)辨識的新模式，提供研究基礎。同時，對課題反映的問題所進行的探討與和提出的建