軀體神經(jīng)-內(nèi)臟神經(jīng)吻合重建大鼠勃起功能的可行性研究.pdf

1、第一部分軀體神經(jīng)-內(nèi)臟神經(jīng)吻合后神經(jīng)再生研究
　　目的:應用神經(jīng)追蹤技術及形態(tài)學方法研究軀體神經(jīng)-內(nèi)臟神經(jīng)顯微吻合后神經(jīng)的再生情況。
　　方法:取成年雄性SD大鼠(250~300g)33只,隨機分為3組:假手術組、神經(jīng)切斷組、神經(jīng)吻合組(每組11只)。假手術組,打開椎管后只分離出左側腰4前根(L4VR)、雙側腰6前根(L6VR)及骶1前根(S1VR)而不切斷。神經(jīng)切斷組,分離出左側L4VR、雙側L6VR及S1VR并切斷。神經(jīng)

2、吻合組,分離出左側L4VR、雙側L6VR及S1VR切斷后,左側L4VR與左側L6VR行端端顯微吻合。術后16周,假手術組、神經(jīng)切斷組、神經(jīng)吻合組各取6只大鼠行逆行追蹤研究,左側盆神經(jīng)節(jié)內(nèi)注射熒光金(FG),大鼠再存活一周后取脊髓切冰凍切片,在熒光顯微鏡下觀察FG陽性神經(jīng)元數(shù)目與分布。3組再各取剩余5只大鼠,分離出5mmL6VR神經(jīng)段,行半薄切片甲苯胺藍染色及透射電鏡超微結構觀察。
　　結果:逆行神經(jīng)追蹤結果顯示,假手術組,大鼠脊髓

3、左側L6及S1脊髓節(jié)段的中間外側柱(SPN)可以看到FG陽性神經(jīng)元。神經(jīng)切斷組,大鼠各個脊髓節(jié)段均未見FG陽性標記神經(jīng)元。神經(jīng)吻合組,左側L4脊髓前角可以見到FG陽性神經(jīng)元。假手術組L6及S1脊髓SPN內(nèi)FG陽性神經(jīng)元數(shù)目分別為13.2±1.3和4.8±0.5。神經(jīng)吻合組L4脊髓前角FG陽性神經(jīng)元為7.9±1.1。神經(jīng)吻合組FG陽性神經(jīng)元數(shù)目顯著多于神經(jīng)切斷組(p<0.05)。半薄切片甲苯胺藍染色顯示,假手術組可見大量正常的有髓神經(jīng)纖維

4、,有髓神經(jīng)纖維數(shù)量為784±45。神經(jīng)切斷組軸突崩解、變性,未見到正常神經(jīng)纖維。神經(jīng)吻合組可見大量有髓神經(jīng)纖維再生,有髓神經(jīng)纖維數(shù)量為510±53。假手術組及神經(jīng)吻合組有髓神經(jīng)纖維數(shù)量均顯著多于神經(jīng)切斷組(p<0.05)。神經(jīng)超微結構示,假手術組大鼠L6VR內(nèi)可見大量發(fā)育成熟的有髓軸突,軸突髓鞘較厚。神經(jīng)切斷組未見到正常形態(tài)的有髓神經(jīng)纖維。神經(jīng)吻合組大鼠L6VR可見大量的有髓神經(jīng)纖維再生,軸突髓鞘較厚,致密,軸漿豐富。
　　結論:

5、逆行神經(jīng)追蹤、半薄切片甲苯胺藍染色及電鏡超微結構研究證明軀體神經(jīng)—內(nèi)臟神經(jīng)通過端端吻合可以實現(xiàn)神經(jīng)再生,再生的神經(jīng)纖維可以長入并取代內(nèi)臟神經(jīng)(L6VR)。
　　第二部分軀體神經(jīng)-內(nèi)臟神經(jīng)吻合對大鼠勃起功能影響研究
　　目的:驗證軀體神經(jīng)-內(nèi)臟神經(jīng)端端吻合后再生的神經(jīng)能否發(fā)揮功能,引發(fā)陰莖勃起。
　　方法:取雄性SD大鼠(體重250~300g)30只,隨機分為3組(每組10只):假手術組,只分離出神經(jīng)而不切斷;神經(jīng)切斷組

6、,雙側L6VR、S1VR及左側L4VR切斷;神經(jīng)吻合組,雙側L6VR、S1VR及左側L4VR切斷后,左側L4VR與左側L6VR行端端顯微吻合。術后16周,假手術組、神經(jīng)切斷組、神經(jīng)吻合組大鼠行海綿體內(nèi)壓力(ICP)測定,三組分別電刺激L6VR、L6VR斷端及L4VR,同時記錄陰莖海綿體內(nèi)壓力及動脈壓力。
　　結果:電刺激時,假手術組達到的最大海綿體壓力(ICPmax)為72.7±2.5mmHg,海綿體壓升高值(ICPincreas

7、e)為60.5±3.3mmHg,海綿體壓力升高值與平均動脈壓比值(ICP/MAP)為0.68±0.03。神經(jīng)切斷組ICPmax為17.1±0.9mmHg,ICPincrease為2.7±0.5mmHg,ICP/MAP為0.03±0.01。神經(jīng)吻合組ICPmax為39.4±2.7mmHg,ICPincrease為26.7±3.0mmHg,ICP/MAP為0.31±0.04。假手術組和神經(jīng)吻合組ICPmax、ICPincrease及ICP/

8、MAP均顯著高于神經(jīng)切斷組(p<0.05)。
　　結論:大鼠軀體神經(jīng)—內(nèi)臟神經(jīng)反射通路建立后,刺激L4VR可以導致海綿體內(nèi)壓力的升高,證實軀體神經(jīng)不但能夠長入并取代內(nèi)臟神經(jīng),再生的神經(jīng)還能發(fā)揮功能,引發(fā)陰莖勃起。
　　第三部分軀體神經(jīng)-內(nèi)臟神經(jīng)吻合重建大鼠勃起功能后陰莖NOS表達及組織學改變
　　目的:探討軀體神經(jīng)—內(nèi)臟神經(jīng)反射通路建立后,大鼠陰莖NOS表達情況及組織學改變。
　　方法:假手術組、神經(jīng)切斷組、神經(jīng)

9、吻合組大鼠(各10只)行海綿體測壓后剪刀取下陰莖組織,取一部分用4％多聚甲醛固定,石蠟包埋,切片行Masson染色,觀察陰莖平滑肌與膠原纖維的變化;另一部分用4%多聚甲醛固定后置入30%蔗糖脫水,冰凍切片行NADPH-黃遞酶染色及nNOS免疫熒光染色,檢測陰莖組織中NOS陽性神經(jīng)纖維表達量。
　　結果:陰莖組織Masson染色后平滑肌和膠原纖維分別呈紅色和藍色。假手術組大鼠平滑肌與膠原纖維比值為0.109±0.008,神經(jīng)切斷組為

10、0.043±0.005,神經(jīng)吻合組為0.089±0.007。假手術組和神經(jīng)吻合組大鼠平滑肌與膠原纖維比值顯著高于神經(jīng)切斷組(P<0.05)。假手術組大鼠陰莖背神經(jīng)中可見大量NADPH陽性神經(jīng)纖維表達。神經(jīng)切斷組NADPH陽性神經(jīng)纖維表達數(shù)量顯著下降。神經(jīng)吻合組NADPH陽性神經(jīng)纖維表達量顯著高于神經(jīng)切斷組(P<0.05)。假手術組陰莖背神經(jīng)中nNOS陽性神經(jīng)纖維所占比例為0.014±0.002。與假手術組相比,神經(jīng)切斷組陰莖背神經(jīng)中nN