直接免疫熒光檢測(cè)GPMV-Ⅰ方法的建立及其應(yīng)用于GPMV-Ⅰ感染雛鵝后病毒在各器官分布規(guī)律的研究.pdf

1、以甲醛滅活的GPMV-Ⅰ尿囊液為抗原，免疫健康白鵝制備鵝抗GPMV-Ⅰ的IgG，再用FITC對(duì)提純的IgG進(jìn)行標(biāo)記，成功建立了檢測(cè)GPMV-Ⅰ抗原的直接免疫熒光組織化學(xué)法。經(jīng)交叉試驗(yàn)，吸收試驗(yàn)，替代試驗(yàn)和陽(yáng)性、陰性對(duì)照表明：該方法具有操作簡(jiǎn)單，特異性好，敏感性高的優(yōu)點(diǎn)。該方法的最佳條件為：以多聚賴氨酸為粘片劑，冰凍切片，在4℃下用丙酮固定處理30min，進(jìn)行直接法染色。標(biāo)記抗體稀釋度為1:16，胰蛋白酶修復(fù)抗原20min，熒光標(biāo)記抗體反

2、應(yīng)時(shí)間為37℃30min，90％緩沖甘油封片，可獲得比較滿意的反應(yīng)效果。 該方法具有特異、直觀、和敏感的特點(diǎn)，可用于GPMV-Ⅰ感染的實(shí)驗(yàn)室診斷、抗原定位以及甲醛固定標(biāo)本的回顧性診斷。 該方法只與GPMV-Ⅰ感染雛鵝組織呈陽(yáng)性反應(yīng)，與小鵝瘟病毒，鵝大腸桿菌，沙門氏菌，巴氏桿菌人工感染并致死雛鵝的肝組織呈陰性反應(yīng)。運(yùn)用此方法，對(duì)人工感染GPMV-Ⅰ后病毒在雛鵝體內(nèi)的分布規(guī)律進(jìn)行了研究，從病毒的時(shí)間分布情況看：GPMV-Ⅰ感

3、染后8h能從肝臟、。腎臟中檢出病毒抗原：感染后12h，能夠從雛鵝的肝臟、脾臟、腎臟、肺臟、十二指腸、胰腺和胸腺中檢出病毒抗原：感染后24h，能從雛鵝的肝臟、肺臟、腺胃、法氏囊等9種組織中檢出病毒抗原：感染后96h僅不能從肌肉、心臟和大腦中檢測(cè)出抗原：感染后‘192h，食道和直腸中己檢測(cè)不出GPMV-Ⅰ抗原，其他組織的陽(yáng)性程度降低；在感染后288h只能從肝臟和腎臟中檢出病毒原。 從感染后病毒各個(gè)組織的分布情況看，感染后從各組織中的

4、檢出病毒情況為：肝臟(17/22)>腎臟(16/22)>氣管(14/22)，肺(14/22)>十二指腸(13/22)>法氏囊(12/22)，胰腺(12/22)>胸腺(11/22)，脾臟(11/22)>腺胃(10/22)>食道(6/22)>直腸(5/22)。運(yùn)用建立的DIF方法對(duì)人工感染GPMV-1后病毒在雛鵝體內(nèi)的分布規(guī)律進(jìn)行研究表明：GPMV-Ⅰ感染雛鵝后4h及20d后均不能從體內(nèi)檢出病毒抗原。GPMV-Ⅰ感染雛鵝后96h病毒在機(jī)體內(nèi)