雛鴨感染坦布蘇病毒后的排毒規(guī)律及病毒在血液、組織中含量變化的研究.pdf

1、2010年，曹貞貞、張大丙首次在我國報(bào)道了坦布蘇病毒感染，該病最初被命名為鴨出血性卵巢炎(DHO)，隨著對(duì)該病研究的深入，通過試驗(yàn)證明該病是由一種新型黃病毒引起的，即坦布蘇病毒(Tembusu virus，TMUV)。坦布蘇病毒感染自爆發(fā)以來，迅速波及福建、上海、江蘇、浙江、山東等地區(qū)，該病的發(fā)生嚴(yán)重威脅著我國水禽業(yè)的發(fā)展，對(duì)我國養(yǎng)鴨業(yè)產(chǎn)生了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
　　目前，已經(jīng)建立的坦布蘇病毒的檢測(cè)方法有很多，包括套式RT-PCR、L

2、AMP、ELISA、地高辛、熒光定量RT-PCR等，其中熒光定量RT-PCR方法具有快捷、精確、敏感性高、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，在多個(gè)領(lǐng)域都有較廣泛的應(yīng)用。本研究利用熒光定量RT-PCR方法，旨在探索坦布蘇病毒在櫻桃谷雛鴨體內(nèi)的排毒規(guī)律，明確病毒在血液及組織中含量的高峰期和變化趨勢(shì)，同時(shí)記錄病鴨發(fā)病情況，確定櫻桃谷雛鴨感染坦布蘇病毒后的潛伏期。為坦布蘇病毒的預(yù)防和控制提供了理論依據(jù)。
　　本試驗(yàn)從疑似感染坦布蘇病毒的病鴨體內(nèi)分離到一株坦

3、布蘇病毒。將110只10日齡健康櫻桃谷雛鴨分為3組，其中，靜脈接種組70只，點(diǎn)眼滴鼻組及自然感染組各20只。經(jīng)靜脈、點(diǎn)眼滴鼻分別接種坦布蘇病毒(TMUV) AHQY株，每只3.5 mL病毒尿囊液（3.11×10-3EID50/只），自然感染組不接種病毒，與靜脈接種組混養(yǎng)。接種后，每隔2d采集泄殖腔棉拭子和血液，并隨機(jī)剖殺3只，應(yīng)用建立的熒光定量RT-PCR方法檢測(cè)病毒的排毒規(guī)律及血液、組織中病毒載量的變化。
　　結(jié)果顯示，分離的病

4、毒經(jīng)RT-PCR檢測(cè)及克隆測(cè)序證明為坦布蘇病毒。3個(gè)組的櫻桃谷雛鴨感染坦布蘇病毒的潛伏期均一致，平均為24 h，試驗(yàn)鴨在感染24 h后出現(xiàn)精神沉郁，采食量減少，排白綠色及棕色稀便的癥狀。櫻桃谷雛鴨在接種病毒后的1～25 d均可排毒，靜脈組及點(diǎn)眼滴鼻組在感染后5d出現(xiàn)排毒高峰，其次為11d和17d出現(xiàn)兩個(gè)小排毒高峰，自然感染組出現(xiàn)高峰的時(shí)間比靜脈及點(diǎn)眼滴鼻組晚2d。靜脈接種組病毒在血液內(nèi)的載量較其他兩組明顯低，高峰出現(xiàn)在感染后7d及19d

5、，點(diǎn)眼滴鼻組高峰同靜脈接種組一致，出現(xiàn)在感染后7d及19d，自然感染組血液中的病毒載量高峰出現(xiàn)在感染后9d及21 d。組織中坦布蘇病毒載量較高的器官主要有腦、胸腺、法氏囊、胰腺、心臟，其次是脾臟、肝臟、腎臟，腺胃、氣管、肺臟和腸道，病毒的相對(duì)表達(dá)量較少。接種病毒后的1-5 d，胸腺、腦、心臟中坦布蘇病毒的載量自感染后持續(xù)升高至5d，之后降低，降低至第7d，然后又升高，并于感染后13d達(dá)到高峰。法氏囊、胰腺、腸道中病毒載量升高至感染后5d