柴甘解憂湯對帕金森病抑郁的作用機(jī)制探討及臨床療效觀察.pdf

1、帕金森病(Parkinsons disease，PD)是一種常見的疾病，它屬于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的變性疾病，于1817年，英國的一名叫做Jame Parkinson的醫(yī)生進(jìn)行了首次報道及臨床描述。它一般都是隱性發(fā)病，運動癥狀以緩慢進(jìn)展的運動遲緩為主要特征，病理學(xué)上的改變主要是中腦黑質(zhì)中多巴胺(dopamine，DA)能神經(jīng)元的變性及缺失，基底節(jié)紋狀體中的神經(jīng)遞質(zhì)-多巴胺分泌不足，路易氏小體形成。與運動癥狀相比，人們往往感覺更大的痛苦來源于非運

2、動癥狀(non motor syndrome，NMS)。NMS對PD患者生活質(zhì)量的影響越來越凸出，給患者及其親人、家屬帶來了沉重的社會負(fù)擔(dān)及影響，其中抑郁癥是PD患者最常見到的非運動癥狀之一，近幾年來發(fā)病率呈逐年升高趨勢，無論是臨床前已經(jīng)有所表現(xiàn)或是作為后期藥物治療伴發(fā)的并發(fā)癥，都使患者忍受了巨大的痛苦，生活質(zhì)量嚴(yán)重下降。然而目前國內(nèi)對PD患者出現(xiàn)抑郁癥狀的關(guān)注程度仍遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠。與西醫(yī)治療手段相比，中醫(yī)中藥治療本病療效持久、治療之后復(fù)發(fā)率

3、低的作用優(yōu)勢越來越凸出。柴甘解憂湯為本課題組通過長期的臨床實踐總結(jié)出的一條對帕金森病抑郁(Parkinson's Disease Depression，PDD)具有良好效果的方劑，其疏肝理氣、養(yǎng)心安神、祛痰開郁的功效卓著，通過前期臨床觀察能明顯改善PD患者的抑郁癥狀。
　　本研究課題首先進(jìn)行柴甘解憂湯的實驗研究部分。我們在結(jié)合前期實驗方法的基礎(chǔ)上，采用6-羥基多巴胺(6-hydroxydopamine，6-OHDA)損毀SD大鼠單

4、側(cè)紋狀體及孤養(yǎng)結(jié)合慢性持續(xù)不可預(yù)見溫和應(yīng)激(chronic unpredictable mild stress，CUMS)的方法進(jìn)行大鼠造模，以西藥抗抑郁藥物-氟西汀作為對照藥物，并觀察下列指標(biāo):①大鼠體重及行為學(xué)變化;②酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測大鼠前額葉皮質(zhì)及海馬單胺遞質(zhì):去甲腎上腺素(norepinephrine，NE)、多巴胺(DA)、5-羥色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）含量改變;③對實驗大鼠的腦組織

5、進(jìn)行尼氏法染色，觀察大鼠腦組織的病理形態(tài)學(xué)的變化;④免疫組化法觀察大鼠海馬腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)陽性表達(dá)。探討柴甘解憂湯治療PDD的作用機(jī)理，為PDD的發(fā)病機(jī)制研究及開辟PDD中醫(yī)中藥治療的新途徑奠定一定的理論和實驗基礎(chǔ)。臨床研究部分，以臨床常見的PDD患者作為研究對象，通過隨機(jī)對照病例的臨床研究，進(jìn)行相關(guān)量表:漢密爾頓-17項(hamilton depress

6、ion scale，HAND-17)、Beck抑郁自評量表(beck depression inventory，BDI)、帕金森綜合評分(unified parkinson disease rating scale，UPDRS)量表的Ⅱ、Ⅲ部分及中醫(yī)癥候評定量表的收集及分析，科學(xué)評價柴甘解憂湯治療PDD患者的臨床療效，以及進(jìn)行藥物安全性評價。以期找到一種有效的并且沒有明顯副作用的治療PDD的方法，從而提高PDD患者的生活質(zhì)量。本課題分為

7、兩部分，摘要如下:
　　第一部分實驗研究
　　實驗一柴甘解憂湯對帕金森病抑郁大鼠的行為學(xué)影響
　　目的:
　　觀察柴甘解憂湯對PDD模型大鼠行為學(xué)改變的影響
　　方法:
　　采用目前國際上公認(rèn)的6-OHDA損毀SD大鼠單側(cè)紋狀體及孤養(yǎng)結(jié)合CUMS的方法建立PDD的大鼠模型。首先使用6-OHDA進(jìn)行左側(cè)紋狀體的兩點注射法，來制備PD的模型，造模完成后經(jīng)阿樸嗎啡(apomorphine，APO)的藥物的誘

8、導(dǎo)使大鼠出現(xiàn)向健側(cè)的旋轉(zhuǎn)行為后，將造模成功的PD大鼠隨機(jī)分為模型組、柴甘解憂湯組和氟西汀組3組，給予單籠飼養(yǎng)及CUMS刺激（包括:禁食24h，禁水24h，晝夜顛倒，4℃冷水游泳5min，潮濕鼠籠24h，夾尾10min，束縛8h），每天隨機(jī)挑選一種刺激方法實施，共持續(xù)21d。21d造模結(jié)束后對模型組、柴甘解憂湯組和氟西汀組，分別灌以蒸餾水、柴甘解憂湯（按生藥量為8g.kg-1）及氟西汀藥液(1.8mg.kg-1)，1次.d-1，共連續(xù)21

9、d。在此過程中分別準(zhǔn)確記錄各次實驗的相關(guān)結(jié)果。時間點包括:CUMS刺激的第1d、7d、14d、21d、灌胃治療的第7d、14d、21d;觀測指標(biāo)包括:體重測量、蔗糖偏嗜實驗及曠場試驗。觀察柴甘解憂湯對PDD模型大鼠的行為學(xué)上的改變。
　　結(jié)果:
　　1、造模階段:與正常組相比，其余三組大鼠體重下降、糖水消耗量明顯降低、水平運動和垂直運動得分降低（P＜0.05）。
　　2、治療階段:①體重方面，治療第7d，模型組、柴甘解

10、憂湯組及氟西汀組大鼠體重均有增加;第14d，與模型組相比，柴甘解憂湯組及氟西汀組體重明顯升高(P＜0.01，P＜0.05);第21d，柴甘解憂湯組體重增長明顯高于模型組（P＜0.01）;兩治療組相比(P＞0.05)，二者在增加大鼠體重方面無明顯差異。②糖水消耗量方面，治療第7d，與模型組相比，柴甘解憂湯組及氟西汀組糖水消耗量均有增加(P＜0.05)，第14、21d，與模型組相比，柴甘解憂湯組及氟西汀組糖水消耗量明顯升高（P＜0.05，P

11、＜0.01）;兩治療組相比(P＞0.05)，二者在改善大鼠糖水消耗量方面無明顯差異。③曠場試驗方面，水平運動:治療第7d，與模型組相比，柴甘解憂湯組及氟西汀組水平活動均有升高（P＜0.05）;第14、21d，與模型組相比，柴甘解憂湯組及氟西汀組水平活動明顯升高(P＜0.01，P＜0.01)，提示二者均可改善大鼠水平活動能力;兩治療組相比(P＞0.05)，二者在改善大鼠水平活動方面無明顯差異。垂直運動:治療第7d，與模型組相比，柴甘解憂湯

12、組及氟西汀組垂直活動次數(shù)均有升高(P＜0.05);第14、21d，與模型組相比，柴甘解憂湯組及氟西汀組垂直活動次數(shù)明顯高于模型組（P＜0.01，P＜0.05）;兩治療組相比(P＞0.05)，二者在改善大鼠垂直活動方面無明顯差異。
　　結(jié)論:
　　6-OHDA兩點注射法損毀SD大鼠單側(cè)紋狀體及孤養(yǎng)結(jié)合CUMS刺激的方法可制備較穩(wěn)定的PDD模型，該模型在PD行為學(xué)上表現(xiàn)為在APO誘導(dǎo)后向健側(cè)的持續(xù)性旋轉(zhuǎn)行為（≥7圈/min），主

13、要表現(xiàn)為首位相接狀，并可伴有咬足、顫抖、流涎、易激惹等行為。在抑郁癥狀上可表現(xiàn)為興趣降低，快樂及興奮感消失，活動性減少，可以模擬PDD的主要核心癥狀。我們發(fā)現(xiàn)柴甘解憂湯可以明顯改善PDD模型大鼠的上述行為學(xué)異常。中藥柴甘解憂湯和西藥氟西汀對該模型均有不同程度的影響，說明我們制作的這種模型可以用于研究藥物對PDD影響的作用機(jī)理研究。
　　實驗二柴甘解憂湯對帕金森病抑郁大鼠腦組織病理形態(tài)學(xué)及BDNF改變的影響
　　目的:

14、　　研究柴甘解憂湯對帕金森病抑郁大鼠腦組織病理形態(tài)學(xué)及BDNF改變的影響。
　　方法:
　　模型制作、分組及治療同實驗一。麻醉狀態(tài)下進(jìn)行心臟灌注，4％多聚甲醛內(nèi)固定取腦組織病理切片，采用尼氏染色及免疫組化染色觀察PDD大鼠海馬區(qū)病理形態(tài)結(jié)構(gòu)的改變及BDNF的相關(guān)實驗室檢測指標(biāo)。
　　結(jié)果:
　　1、海馬尼氏染色:我們觀察到正常組的大鼠海馬神經(jīng)元的結(jié)構(gòu)形態(tài)基本正常，神經(jīng)元錐體細(xì)胞排列整齊而且緊密，多為大中型錐體細(xì)胞

15、，細(xì)胞質(zhì)呈均一的藍(lán)色，核仁明顯可見，尼氏體呈均一的紫藍(lán)色著色，清晰而明顯。PDD模型組大鼠神經(jīng)元的數(shù)目明顯減少，神經(jīng)元錐體細(xì)胞形態(tài)皺縮，排列很紊亂，形態(tài)也很不完整，細(xì)胞核固縮甚至有偏移出現(xiàn)，尼氏體可見淺染，部分尼氏體溶解甚至消失，胞質(zhì)呈蒼白色。柴甘解憂湯組的大鼠，可見部分神經(jīng)元的形態(tài)皺縮，部分神經(jīng)元形態(tài)不完整，神經(jīng)元椎體細(xì)胞排列比較紊亂，部分尼氏體染色變淺染或者尼氏體徹底溶解，但整體比較，比模型組有所好轉(zhuǎn)，完整神經(jīng)元數(shù)目比較模型組而言，

16、有所增加，尼氏體的染色數(shù)量也相對有所增加。氟西汀組的大鼠神經(jīng)元錐體細(xì)胞形態(tài)美觀、完整，排列整齊，形態(tài)雖然部分略有皺縮，但尼氏體染色均比較深。
　　2、海馬免疫組化染色:①正常組大鼠海馬BDNF陽性細(xì)胞排列整齊而有序，細(xì)胞數(shù)量密集存在，可見胞漿著色深。PDD模型組大鼠海馬BDNF陽性細(xì)胞排列很紊亂，細(xì)胞數(shù)量也可見明顯減少，并呈散在性之分布，神經(jīng)元椎體細(xì)胞的胞體萎縮明顯，著色均為淡染，部分可呈空泡狀。柴甘解憂湯組大鼠海馬BDNF陽性細(xì)

17、胞排列較為紊亂，數(shù)量有所丟失，著色均比較淺，有的為空泡狀，但較模型組有所好轉(zhuǎn)。氟西汀組大鼠海馬BDNF陽性細(xì)胞排列較為整齊，細(xì)胞的一般形態(tài)尚可，數(shù)量較正常組略有減少，胞體染色均較深。②與正常組相比，模型組大鼠海馬BDNF陽性染色面積明顯下降，二者相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);與模型組相比，柴甘解憂湯組及氟西汀組大鼠海馬BDNF陽性染色面積明顯上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。柴甘解憂湯組大鼠海馬BDNF陽性染色面積低于氟西

18、汀組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。③與正常組相比，模型組大鼠海馬BDNF陽性蛋白積分光密度明顯減小，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。與模型組相比，柴甘解憂湯組及氟西汀組大鼠海馬BDNF陽性蛋白積分光密度明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。柴甘解憂湯組大鼠海馬BDNF陽性蛋白積分光密度低于氟西汀組，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）④與正常組相比，模型組大鼠海馬BDNF陽性蛋白平均光密度明顯減小，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.0

19、1)。與模型組相比，柴甘解憂湯組及氟西汀組大鼠海馬BDNF陽性蛋白平均光密度明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。柴甘解憂湯組大鼠海馬BDNF陽性蛋白平均光密度低于氟西汀組，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。⑤與正常組相比，模型組大鼠海馬BDNF陽性細(xì)胞數(shù)目明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。與模型組相比，柴甘解憂湯組及氟西汀組大鼠海馬BDNF陽性細(xì)胞數(shù)目明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。柴甘解憂湯組大鼠海馬BD

20、NF陽性細(xì)胞數(shù)目低于氟西汀組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　我們所建立的PDD大鼠模型存在海馬組織病理結(jié)構(gòu)改變及BDNF的損害，PDD大鼠模型腦內(nèi)海馬區(qū)BDNF陽性細(xì)胞表達(dá)較正常組有所降低，柴甘解憂湯組干預(yù)可上調(diào)抑郁所致的BDNF陽性表達(dá)，其海馬區(qū)BDNF表達(dá)較模型組明顯升高，提示上調(diào)PDD模型大鼠海馬區(qū)BDNF陽性表達(dá)可能是柴甘解憂湯對PDD干預(yù)作用的環(huán)節(jié)之一。
　　實驗三柴甘解憂湯對帕金森病抑

21、郁大鼠腦組織單胺遞質(zhì)改變的影響
　　目的:
　　研究柴甘解憂湯對帕金森病抑郁大鼠腦組織單胺遞質(zhì)改變的影響。
　　方法:
　　模型制作、分組及治療同實驗一。過度麻醉狀態(tài)下將實驗大鼠斷頭取腦，于冰盤上將大腦剝離出來，用冰生理鹽水沖去附于腦組織表面的血液，并迅速分離出前額葉皮質(zhì)及雙側(cè)海馬，稱重后加9倍的生理鹽水，于3000r.min下離心15min，去上清，按照酶聯(lián)免疫吸附測試的試劑盒說明檢測NE、DA、5-HT的含量

22、。
　　結(jié)果:
　　1、前額葉皮質(zhì)區(qū):與正常組相比，模型組NE、DA、5-HT含量明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）;與模型組相比，柴甘解憂湯組和氟西汀組均可增加大鼠前額葉皮質(zhì)區(qū)NE、DA、5-HT的含量，且氟西汀組的含量高于柴甘解憂湯組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);
　　2、海馬區(qū):與正常組相比，模型組NE、DA、5-HT含量明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);與模型組相比，柴甘解憂湯組和氟西汀

23、組均可增加NE、DA、5-HT的含量;兩組增加NE含量方面，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);柴甘解憂湯組DA含量高于氟西汀組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）;氟西汀組5-HT含量高于柴甘解憂湯組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。
　　結(jié)論:
　　建立的PDD大鼠模型腦前額葉皮質(zhì)和海馬區(qū)單胺遞質(zhì)含量明顯降低，柴甘解憂湯組干預(yù)可糾正抑郁所致的單胺遞質(zhì)含量的異常，其前額葉皮質(zhì)和海馬區(qū)單胺遞質(zhì)含量較模型組明顯升高，提示提高PD

24、D模型大鼠前額葉皮質(zhì)和海馬區(qū)單胺遞質(zhì)含量可能是柴甘解憂湯發(fā)揮抗PDD作用的另一環(huán)節(jié)。
　　第二部分柴甘解憂湯對帕金森病抑郁的臨床療效觀察
　　目的:
　　客觀評價柴甘解憂湯用于臨床的有效性、安全性，為臨床用藥的篩選提供依據(jù)。
　　方法:
　　采用隨機(jī)對照方法，收集70例符合研究標(biāo)準(zhǔn)的患者，按隨機(jī)數(shù)字表，以1∶1的比例分為柴甘解憂湯組和氟西汀組，每組各35例，柴甘解憂湯組服用本院中藥房提供的柴甘解憂湯湯劑，日

25、1劑，約150ml。氟西汀組服用鹽酸氟西汀膠囊（又名百優(yōu)解，蘇州禮來有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字H20040533）治療，20mg/日（早飯后服用）。治療周期為2個月。治療前及治療后采用HAMD-17項、BDI、UPDRSⅡ、Ⅲ部分及中醫(yī)癥候評定量表評價臨床療效，并同時觀察藥物不良反應(yīng)，評價藥物安全性。
　　結(jié)果:
　　本研究納入70例病例，其中脫落10例，共完成60例。兩組病例的一般資料包括年齡、性別、文化程度、Hoehn-Ya

26、hr分級、抑郁程度、HAMD、BDI、UPDRSⅡ、Ⅲ評分差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。
　　1、以HAMD量表評價總體療效顯示:柴甘解憂湯組總有效率為73.33％，氟西汀組總有效率為80.00％。兩組在治療不同程度帕金森病抑郁癥上比較顯示:在治療輕中度帕金森病抑郁癥上兩組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);在重度帕金森病抑郁癥的療效上兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。治療前與治療后HAMD評分比較顯示:

27、柴甘解憂湯組治療8周后評分(14.27±4.93)明顯低于治療前評分(22.00±4.54)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);氟西汀組治療8周后評分(14.00±5.05)明顯低于治療前評分(22.57±4.55)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);兩組間對照比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，說明二者在降低HAMD積分方面療效相當(dāng)。
　　2、治療前與治療后BDI評分比較顯示:柴甘解憂湯組治療8周后評分(17.20±5.02

28、)明顯低于治療前評分(32.17±7.43)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);氟西汀組治療8周后評分(17.93±5.19)明顯低于治療前評分(31.63±7.52)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）;兩組間對照比較，治療8周后兩組評分差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，說明二者在降低BDI積分方面療效相當(dāng)。
　　3、治療前與治療后UPDRSⅡ、Ⅲ評分比較顯示:柴甘解憂湯組治療8周后對PDD患者UPDRSⅡ（日?；顒臃e分）(9.9

29、0±2.28)明顯低于治療前評分(14.37±2.53)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）;UPDRSⅢ（運動功能積分）治療后(17.03±2.37)與治療前(17.13±2.36)相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）;氟西汀組治療8周后UPDRSⅡ（日常活動積分）(11.30±2.25)明顯低于治療前評分(14.53±2.32)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);UPDRSⅢ（運動功能積分）治療后(17.13±2.36)與治療前(1

30、7.20±2.31)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);兩組間對照比較，對UPDRSⅡ（日?；顒臃e分）的改善，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，說明柴甘解憂湯組療效優(yōu)于氟西汀組;在降低UPDRSⅢ（運動功能積分）方面，差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞0.05（P=0.805），提示柴甘解憂湯組與氟西汀組療效相當(dāng)。
　　結(jié)論:
　　1、柴甘解憂湯可明顯降低帕金森病抑郁患者的HAMD、BDI及UPDRSⅡ評分，提高PDD患者的生活質(zhì)量，