河北省急性弛緩性麻痹病例中非脊髓灰質(zhì)炎腸道病毒感染流行病學(xué)特征分析.pdf

1、目的:從河北省急性弛緩性麻痹(AFP)病例的糞便標(biāo)本中分離病毒，結(jié)合個(gè)案調(diào)查資料，綜合分析非脊髓灰質(zhì)炎腸道病毒(NPEV)在AFP病例中感染的流行病學(xué)特征，并對(duì)NPEV毒株進(jìn)行血清型別鑒定，明確AFP病例中的優(yōu)勢(shì)毒株，為AFP病例的防治和疫苗研制提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法:
　　1、對(duì)河北省AFP病例糞便標(biāo)本利用人橫紋肌肉瘤細(xì)胞(RD)和轉(zhuǎn)人脊髓灰質(zhì)炎病毒受體的小鼠肺細(xì)胞(L20B)進(jìn)行病毒分離。
　　2、細(xì)胞出現(xiàn)病變后

2、利用脊髓灰質(zhì)炎病毒(PV)標(biāo)準(zhǔn)血清，通過(guò)中和實(shí)驗(yàn)篩檢NPEV。
　　3、篩檢出NPEV后，采用不同的特異性引物擴(kuò)增目的基因片段，根據(jù)VP1區(qū)序列結(jié)果，確定NPEV血清型別，并分析核苷酸和氨基酸同源性，同時(shí)生成系統(tǒng)進(jìn)化樹，對(duì)毒株基因特征進(jìn)行分析。
　　4、對(duì)既不能被PV標(biāo)準(zhǔn)血清中和，又不能被引物擴(kuò)增的病毒分離株，使用Real-time PCR熒光定量檢測(cè)試劑盒篩檢腺病毒。
　　5、應(yīng)用軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析。

3、　　結(jié)果:
　　1、河北省2008～2012年AFP病例報(bào)告及標(biāo)本病毒檢出情況
　　2008～2012年河北省AFP病例監(jiān)測(cè)系統(tǒng)共報(bào)告AFP病例1998例，其中1974例采集了糞便標(biāo)本并完成了病毒分離，共篩檢到374例病毒陽(yáng)性病例，其中PV陽(yáng)性73例，NEPV陽(yáng)性301例，陽(yáng)性分離率分別為3.70％、15.25％。
　　2、 NPEV陽(yáng)性病例分布及殘留麻痹情況
　　從地區(qū)分布看，NPEV陽(yáng)性病例位列前三的是邯鄲、

4、邢臺(tái)和保定，NPEV分離率最高的是邯鄲、邢臺(tái)和承德，各地區(qū)NPEV分離率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。從時(shí)間分布看，NPEV陽(yáng)性病例檢出數(shù)量及分離率較高的時(shí)段均集中在5～11月，存在明顯的夏秋季分布高峰。病例中男性多于女性，性別間檢出率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。從年齡分布看，0～2歲嬰幼兒組NPEV分離率最高，隨年齡段的遞增呈降低趨勢(shì)。殘留麻痹率PV陽(yáng)性組＞NPEV陽(yáng)性組＞陰性組，三者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3、NPEV毒株的分子定型
　　本研

5、究共獲得176株NPEV毒株完整的VP1序列，和基因庫(kù)比對(duì)后，共有28種血清型。包括HEV-A組7種，HEV-B組21種，沒(méi)有HEV-C和HEV-D組病毒。CVA10和EV-A71連續(xù)5年均有檢出，其余血清型5年中間斷出現(xiàn)。NPEV血清型別分布有如下特點(diǎn):邯鄲種類最多，其次是邢臺(tái)和保定;5～11月份最為集中;5歲以下兒童血清型別最為復(fù)雜。從單一NPEV血清型來(lái)看，EV-A71數(shù)量最多，占定型總數(shù)的39.77％。在全省有10個(gè)設(shè)區(qū)市以EV

6、-A71為主，而且在全年有10個(gè)月份以EV-A71為主，可見(jiàn)EV-A71為全省AFP病例中的優(yōu)勢(shì)毒株，感染人群以0～2歲嬰幼兒為主。HEV-A組AFP病例預(yù)后要比HEV-B組差，有殘留麻痹的可能性更大。
　　4、NPEV優(yōu)勢(shì)毒株EV-A71 VP1區(qū)基因特征分析
　　在每個(gè)地區(qū)隨機(jī)選擇一條序列進(jìn)行比較后顯示，核苷酸同源性在94.1％～99.4％、氨基酸同源性在98.3％～100％之間。與國(guó)內(nèi)外的參考株VP1區(qū)進(jìn)行核昔酸和氨基

7、酸同源性比較發(fā)現(xiàn)，70株EV-A71病毒VP1區(qū)核苷酸序列與A、B基因型VP1區(qū)核苷酸、氨基酸同源性均較低，而與C基因型接近;進(jìn)一步比較，病毒株與C4亞型代表株核苷酸、氨基酸同源性最高。可認(rèn)為2008～2012年河北省70株從AFP病例中分離到的EVA-71病毒株均屬于C4亞型。與全國(guó)多個(gè)省市的C4亞型相比，病毒株VP1區(qū)核苷酸、氨基酸同源性C4a高于C4b分支。VP1區(qū)系統(tǒng)進(jìn)化樹分析顯示，2008～2012年河北省AFP病例中EV-A

8、71分離株全部處于C4亞型C4a分支。EV-A71在河北省和中國(guó)大陸的其他省份進(jìn)化情況一致，基因型穩(wěn)定，沒(méi)有發(fā)生變化。
　　結(jié)論:
　　1、NPEV感染在河北省廣泛分布，血清型別多樣。感染高發(fā)時(shí)段主要集中在5～11月，感染人群以嬰幼兒為主。
　　2、NPEV陽(yáng)性組AFP病例殘留麻痹率顯著高于陰性組，繼PV之后，NPEV已成為AFP的重要病原。
　　3、HEV-A組殘留麻痹率顯著高于HEV-B組，HEV-A組預(yù)后比