真武膠囊的藥效學(xué)研究.pdf

1、真武湯出自《傷寒論》，由附子、生姜、茯苓、白術(shù)、白芍組成，是為表證過汗傷陽、少陰病陽虛水泛病證而設(shè)的名方。后來在治療各種陽虛陰盛、水氣泛溢之證方面，療效顯著[1]。主要有增強(qiáng)心肌收縮力，對缺血性心肌的血氧供應(yīng)有改善作用，使尿量增多，使肌酐、尿素氮減少等的作用。根據(jù)臨床的報(bào)道[2]:用真武湯添加紅花、丹參等，治療充血性心力衰竭，與一起服用強(qiáng)心利尿的西藥進(jìn)行對照，結(jié)果顯示該組方對心腎功能均有明顯改善，對機(jī)體內(nèi)環(huán)境如血液中鈉離子、鉀離子、氯離

2、子、血漿滲透壓、血糖、尿素氮、血液的pH值都無顯著改變。這個(gè)組方對機(jī)體內(nèi)環(huán)境干擾比較小。由于真武湯煎煮過程比較復(fù)雜，患者服用不方便，某制藥公司將真武湯改劑型為膠囊。課題組按照《藥品注冊管理辦法》新藥技術(shù)要求，對真武膠囊做臨床前藥效學(xué)評價(jià)及安全性評價(jià)。本課題為該項(xiàng)目的內(nèi)容之一——臨床前藥效學(xué)評價(jià)。
　　目的:
　　分別研究真武膠囊粉對地塞米松所致KM雄性小鼠腎陽虛模型的溫陽作用;給大鼠腹腔注射同種動物腎皮質(zhì)混懸液，復(fù)制主動型H

3、eymann腎炎模型，給予不同劑量的真武膠囊粉，研究藥物對主動型Heymann腎炎模型的作用并進(jìn)行初步的機(jī)制探討;給予SPF級SD大鼠不同劑量的真武膠囊粉，觀察并測定給藥后6h尿量，并測尿液中Na+、K+、Cl-的濃度，觀察真武膠囊粉對大鼠的利尿作用，并進(jìn)行初步的機(jī)理探討。
　　方法:
　　1.真武膠囊粉對地塞米松所致KM雄性小鼠腎陽虛的溫陽試驗(yàn)采用肌肉注射的方式給予地塞米松磷酸鈉注射液復(fù)制腎陽虛模型，分析真武膠囊粉對該模型

4、動物肛溫，自主活動，游泳時(shí)間的影響，對白細(xì)胞(WBC)，紅細(xì)胞(RBC)，環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)，環(huán)磷酸腺苷(cAMP)含量的影響。取垂體，腎上腺，生殖腺做病理切片，取肝臟，脾臟，胸腺測重量，計(jì)算臟器系數(shù)，來評價(jià)真武膠囊對陽虛的作用。
　　2.真武膠囊對大鼠利尿的作用采用一次灌胃給予1％的鹽水復(fù)制水負(fù)荷大鼠，分析不同濃度的真武膠囊混懸液對大鼠6小時(shí)尿量的影響，及對尿液中PH值及Na+、K+、Cl-的濃度的影響，來評價(jià)真武膠囊對大鼠

5、的利尿作用。
　　3.真武膠囊粉對主動型Heymann腎炎大鼠的治療作用研究首先用大鼠腎臟與弗氏佐劑按文獻(xiàn)方法制備腎皮質(zhì)混懸液，然后將上述混懸物給大鼠腹腔注射，每兩周一次，復(fù)制主動型Heymann腎炎模型。待尿蛋白顯示模型形成后，將造模成功的50只大鼠按體重隨機(jī)法分為5組:模型對照組(0.05gCMC-Na/kg)、真武膠囊低劑量組(5g生藥/kg)、真武膠囊中劑量組(10g生藥/kg)、真武膠囊高劑量組（20g生藥/kg）、陽性

6、藥物對照組(雷公藤11mg/kg)，分別灌胃給予上述藥物一個(gè)月。通過觀察給藥前后大鼠體重、一般狀況、尿蛋白含量，腹主動脈取血測血清中肌酐和尿素氮、總蛋白、白蛋白的含量，解剖取腎臟并計(jì)算臟器系數(shù)并進(jìn)行腎臟病理組織學(xué)檢查，研究真武膠囊粉對主動型Heymann腎炎大鼠的治療作用。
　　結(jié)果:
　　1.與溶媒對照組相比，模型對照組小鼠體重增長顯著減慢，自主活動次數(shù)顯著減少，負(fù)重游泳時(shí)間顯著縮短，且血液中cAMP含量顯著降低，而cGM

7、P含量顯著升高。和模型對照組相比，真武膠囊粉中、高劑量組和陽性藥物對照組小鼠體重增長差異顯著，自主活動次數(shù)顯著增加，負(fù)重游泳時(shí)間顯著延長，且血液中cAMP含量顯著升高，而cGMP含量顯著降低，且和溶媒對照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;病理組織學(xué)檢查表明陽性藥物和中、高劑量真武膠囊粉能顯著改善腎陽虛所致腎上腺、睪丸、脾臟、胸腺的病理狀況和功能，提高小鼠的免疫功能。說明真武膠囊粉中、高劑量組和陽性藥物對照組對地塞米松所致的腎陽虛有良好的溫陽作用

8、>　　2.與溶媒對照組相比，陽性藥物對照組及真武膠囊粉高、中劑量組總尿量均明顯增加;陽性藥物對照組在給藥后3h、5h尿量出現(xiàn)明顯增加;真武膠囊粉高劑量組在4h，5h，6h尿量均明顯增加;真武膠囊粉中劑量組在給藥后5h，6h尿量明顯增加;真武膠囊粉高、中劑量組尿液中Na+總量明顯增加，在1h時(shí)真武膠囊粉高、中劑量組及陽性藥物對照組Na+含量明顯增加;陽性藥物對照組尿K+總量明顯增加。陽性藥物對照組在1h，2h尿K+含量明顯增加，真武膠囊粉

9、高劑量組在2h尿K+含量明顯增加;各組動物在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)及尿C1-總量均未見明顯改變。
　　3.與正常對照組相比（即給藥期的溶媒對照組），造模組大鼠尿蛋白顯著升高，體重增長明顯減慢，提示造模成功。給藥中期，與模型對照組相比，真武膠囊粉高劑量組及陽性藥物對照組尿蛋白水平顯著降低(P＜0.05);給藥一個(gè)月后，與模型對照組相比，真武膠囊粉高、中、低劑量組及陽性藥物對照組尿蛋白水平均顯著降低（P＜0.01）;血清生化指標(biāo)的檢測結(jié)果顯示，真

10、武膠囊粉高劑量和陽性藥物對照組血清肌酐水平顯著降低(P＜0.05)，真武膠囊粉高、中、低劑量組及陽性藥物對照組尿素氮水平均顯著降低(P＜0.01)，真武膠囊粉高、中劑量組及陽性藥物對照組總蛋白水平顯著升高(P＜0.05)，真武膠囊粉高、中劑量組及陽性藥物對照組白蛋白水平顯著升高(P＜0.05)，各給藥組的白/球比未見明顯改變。
　　病理結(jié)果顯示，HE染色鏡檢發(fā)現(xiàn)，溶媒對照組大鼠腎組織無變性、壞死，無腎小球固縮、閉塞及腎小管擴(kuò)張，組

11、織間隙無水腫，無炎性細(xì)胞浸潤。模型對照組腎臟大多數(shù)腎小球明顯腫脹，腎小球毛細(xì)血管叢內(nèi)細(xì)胞數(shù)明顯增多，以內(nèi)皮細(xì)胞增多為主，毛細(xì)血管壁明顯增厚，腎小球固縮、閉塞，腎小管出現(xiàn)廣泛性損傷，水腫、擴(kuò)張或萎縮。陽性藥物對照組、真武膠囊粉高劑量組腎臟病變明顯改善，腎小球內(nèi)皮細(xì)胞有不明顯的增生，腎小管上皮細(xì)胞的混濁性腫脹有明顯的減輕，沒有腎小管的管腔狹窄情況，腎小球的病變數(shù)量減少顯著。真武膠囊粉中、低劑量組對腎小球的病變也有改善，但效果不如陽性藥物對照

12、組和真武膠囊粉高劑量組。六氨銀染色后鏡檢發(fā)現(xiàn)，溶媒對照組大鼠未見腎小球基底膜，模型對照組大量腎小球基底膜彌漫性增厚。陽性藥物對照組、真武膠囊粉高劑量組腎小球基底膜未見或輕微增厚，中、低劑量組腎小球基底膜較陽性藥物對照組、真武膠囊粉高劑量組厚，與模型對照組比較亦有改善。
　　結(jié)論:
　　真武膠囊粉中、高劑量組對地塞米松所致的腎陽虛有良好的溫陽作用;對主動型Heymann腎炎大鼠有治療作用，可明顯改善腎功能，減輕基底膜增厚等病理