含噁唑環(huán)大環(huán)內(nèi)酯類抗腫瘤抗生素FW-04-806的研究.pdf

1、在影響人類健康的世界性問(wèn)題中，腫瘤疾病已成為僅次于心血管疾病的人類健康第二號(hào)“殺手"。藥物治療是癌癥治療的三大療法之一，目前科學(xué)家已發(fā)現(xiàn)了幾十種有效的抗腫瘤藥物，但對(duì)危害人類生命健康最嚴(yán)重的實(shí)體瘤的藥物治療卻未能達(dá)到滿意的效果，因此開(kāi)發(fā)新型抗腫瘤藥物依然是藥物篩選的熱點(diǎn)。FW-04-806是從一株來(lái)源于國(guó)內(nèi)的土壤鏈霉菌FIM-04-806發(fā)酵液中提取出來(lái)的具有抗腫瘤活性的雙噁唑環(huán)大環(huán)內(nèi)酯化合物，經(jīng)過(guò)現(xiàn)代有機(jī)波譜分析和 x-晶體衍射實(shí)驗(yàn)表

2、明其分子結(jié)構(gòu)式與聚酮化合物Conglobatin相同。近年來(lái)大環(huán)內(nèi)酯類抗腫瘤抗生素的開(kāi)發(fā)成為腫瘤治療藥物開(kāi)發(fā)的一個(gè)熱點(diǎn)，且含噁唑環(huán)的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素表現(xiàn)出很強(qiáng)的抗腫瘤活性，因此含噁唑環(huán)大環(huán)內(nèi)酯結(jié)構(gòu)的FW-04-806具有一定的研究?jī)r(jià)值。同時(shí)，在初步的藥理學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)中，F(xiàn)W-04-806表現(xiàn)出對(duì)多株腫瘤細(xì)胞系的增殖抑制作用和良好的藥代動(dòng)力學(xué)特性，引起了我們的極大關(guān)注。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴對(duì)FW-04-806產(chǎn)生菌鏈霉菌F

3、IM-04-806進(jìn)行微生物分子生物學(xué)和常規(guī)菌種選育相結(jié)合的研究方法，并結(jié)合進(jìn)行系統(tǒng)的菌種發(fā)酵營(yíng)養(yǎng)學(xué)的研究，提供工業(yè)化生產(chǎn)菌株。⑵在搖瓶培養(yǎng)水平和全自動(dòng)中試發(fā)酵罐上開(kāi)展鏈霉菌FIM-04-806發(fā)酵的條件研究、代謝產(chǎn)物變化、菌株次級(jí)代謝產(chǎn)物與生產(chǎn)條件變化的關(guān)系，探索了適應(yīng)于工業(yè)化發(fā)酵培養(yǎng)的合適營(yíng)養(yǎng)配方和生產(chǎn)條件，優(yōu)化生產(chǎn)工藝，提供工業(yè)化發(fā)酵生產(chǎn)工藝。⑶建立了完善FW-04-806的提取純化路線和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，使FW-04-806的純度達(dá)到9

4、8％以上，單個(gè)雜質(zhì)控制在0.5%以內(nèi)，確保了樣品的質(zhì)量。⑷MTS法檢測(cè)FW-04-806對(duì)多種腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用。不同濃度FW-04-806作用細(xì)胞48h后，根據(jù)MTS結(jié)果計(jì)算出FW-04-806對(duì)各腫瘤細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度（IC50），得出FW-04-806的抗腫瘤譜。⑸采用化學(xué)蛋白質(zhì)組化研究、計(jì)算機(jī)模擬對(duì)接、Hsp90和Cdc37體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)、免疫共沉淀、siRNA基因敲除及實(shí)時(shí)定量PCR等實(shí)驗(yàn)，對(duì)FW-04-806作用機(jī)制進(jìn)行研

5、究，結(jié)果表明FW-04-806是一個(gè)新型的Hsp90抑制劑，能夠直接與Hsp90的N端結(jié)合，并且可以抑制分子伴侶 Hsp90和輔分子伴侶細(xì)胞分裂周期蛋白Cdc37之間的反應(yīng)。⑹FW-04-806的抗腫瘤作用從分子水平和細(xì)胞水平進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果證明FW-04-806引起腫瘤細(xì)胞的G2/M期阻滯和凋亡，引起Hsp90客戶蛋白的降解，并且可以使Hsp90客戶蛋白的表達(dá)量隨FW-04-806濃度和作用時(shí)間增大而下降。⑺通過(guò)對(duì)小鼠H22、人乳腺癌S