大環(huán)雙內(nèi)酯化合物FW-04-806對(duì)HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞的抗腫瘤作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究FW-04-806對(duì)HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞的體內(nèi)外抗腫瘤活性及其機(jī)制，探討其與Lapatinib的聯(lián)合作用，為大環(huán)雙內(nèi)酯化合物FW-04-806這種潛在的Hsp90抑制劑的開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　方法：（1）四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法體外檢測(cè)FW-04-806對(duì)HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞NCI-N87、OE19的增殖抑制作用；（2）集落形成法檢測(cè)FW-04-806對(duì)HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞的集落形成抑制能力；（3）通過(guò) FITC

2、/PI雙染法檢測(cè) FW-04-806對(duì)HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞的凋亡作用；（4）通過(guò)PI染色法檢測(cè)FW-04-806對(duì)胃癌細(xì)胞周期的影響；（5）Western blot法檢測(cè)對(duì)胃癌細(xì)胞蛋白的影響；（6）免疫共沉淀法檢測(cè)蛋白間相互作用；（7）免疫組化觀察Hsp90客戶蛋白的表達(dá)變化；（8）體內(nèi)異種移植瘤模型檢測(cè)FW-04-806的抑瘤率。
　　結(jié)果：（1）FW-04-806呈劑量依賴性抑制胃癌細(xì)胞 NCI-N87、OE19、AGS、SG

3、C-7901的增殖，對(duì)應(yīng)半數(shù)抑制率分別為24.17、29.61、58.13、60.59μmol·L-1，結(jié)果顯示 FW-04-806對(duì) HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞（NCI-N87、OE19）更敏感；（2）長(zhǎng)期集落形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，F(xiàn)W-04-806對(duì)HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞NCI-N87、OE19的集落形成能力有明顯的抑制作用；（3）隨著FW-04-806作用NCI-N87和OE19細(xì)胞藥物濃度的增加，流式細(xì)胞儀檢測(cè)到的細(xì)胞凋亡率逐漸增加；（4）

4、FW-04-806明顯改變細(xì)胞周期，減少S期，阻滯胃癌細(xì)胞周期于G2-M期；（5）FW-04-806阻滯HER2下游細(xì)胞信號(hào)通路，抑制HER2、Akt和ERK的磷酸化，增加凋亡蛋白cleaved caspase3、cleaved parp的表達(dá)；（6）免疫共沉淀結(jié)果顯示，F(xiàn)W-04-806作用胃癌細(xì)胞OE19，誘使Hsp90/CDC37復(fù)合物解離，減少CDC37與Hsp90結(jié)合（；7）免疫組化切片圖可以觀察到，F(xiàn)W-04-806明顯減少

5、Hsp90客戶蛋白HER2、Akt的表達(dá)；（8）FW-04-806在異種移植瘤模型中有效抑制腫瘤生長(zhǎng)，與對(duì)照組相比，200mg/k g實(shí)驗(yàn)組抑瘤率為48.0％，P<0.01，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；（9)FW-04-806聯(lián)合Lapatinib具有協(xié)同作用，使增殖抑制和凋亡誘導(dǎo)增強(qiáng)。
　　結(jié)論：（1）FW-04-806對(duì)HER2陽(yáng)性的胃癌細(xì)胞具有良好的體內(nèi)外抗腫瘤作用。（2）FW-04-806可能是一種潛在的Hsp90抑制劑，通過(guò)干擾