盆底骨骼肌細(xì)胞受力前后的超微結(jié)構(gòu)變化.pdf

1、目的
　　應(yīng)用Flexercell4000細(xì)胞加載系統(tǒng)對盆底骨骼肌細(xì)胞加載外力，闡明力加載實驗中加力時間和加力強(qiáng)度與細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)損傷的關(guān)系及細(xì)胞凋亡情況，探討盆底骨骼肌細(xì)胞機(jī)械性損傷前后α-肌動蛋白（α-actin）基因表達(dá)水平的變化。
　　方法
　　首先取腹會陰聯(lián)合直腸癌根治術(shù)病人的盆底肛提肌組織，對其進(jìn)行體外原代培養(yǎng)、純化和鑒定，取2-5代穩(wěn)定的傳代骨骼肌細(xì)胞，為后續(xù)加力實驗提供物質(zhì)基礎(chǔ)。然后采用Flexercel

2、l4000細(xì)胞加載系統(tǒng)對細(xì)胞加載外力，設(shè)置加力強(qiáng)度分別為0、3％和6%，加力時間分別為6小時和24小時。最后收集細(xì)胞，借助透射電子顯微鏡對加力前后骨骼肌細(xì)胞形態(tài)及其超微結(jié)構(gòu)變化作出定性描述；應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測骨骼肌細(xì)胞加力前后細(xì)胞的凋亡情況；通過實時定量熒光PCR(RT-PCR)法來測定細(xì)胞受力前后α-肌動蛋白(α-actin)基因表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果
　　1.通過透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，盆底骨骼肌細(xì)胞在加力的條件下，細(xì)胞

3、形態(tài)及其內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)會發(fā)生一系列適應(yīng)性改變或損傷性變化，隨著加力時間和加力強(qiáng)度的增加，細(xì)胞損傷性變化更明顯。在加力3%6h的條件下，與未加力組相比，細(xì)胞形態(tài)變化不大，隨著加力強(qiáng)度和加力時間的延長，細(xì)胞的形態(tài)逐漸破碎，排列方式紊亂，細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)不清甚至消失，線粒體腫脹變圓，嵴變短甚至消失，細(xì)胞核內(nèi)陷、固縮，異染色質(zhì)增多，溶酶體增多。
　　2.流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示：加力組與未加力組相比，骨骼肌細(xì)胞的凋亡率增加。在加力時間固定的條件下，

4、加力強(qiáng)度6%下的細(xì)胞凋亡率比加力強(qiáng)度3%下的細(xì)胞凋亡率增加（F=44.742，P＜0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義，表明隨著加力強(qiáng)度的增加，骨骼肌細(xì)胞凋亡率增加；在加力強(qiáng)度固定的條件下，加力時間為24小時的細(xì)胞凋亡率比加力時間為6小時的凋亡率增加（F=15.998，P＜0,05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義，表明隨著加力時間的延長，細(xì)胞凋亡率增加。且加力時間和加力強(qiáng)度存在著交互作用（F=3.575，P＜0.05），在加力時間24小時和加力強(qiáng)度為6%的

5、條件下，細(xì)胞凋亡率增加最明顯。
　　3.RT-PCR法檢測結(jié)果示：加力組與未加力組相比，骨骼肌細(xì)胞的α-actinmRNA的表達(dá)水平下降，在加力時間固定的情況下，加力強(qiáng)度為6%的α-actinmRNA的表達(dá)水平比加力強(qiáng)度為3%的基因表達(dá)水平下降（F=90.743，P＜0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義，表明隨著加力強(qiáng)度的增加，細(xì)胞的α-actinmRNA的表達(dá)水平隨著下降。在加力強(qiáng)度固定的情況下，加力時間為24小時的α-actinmRN

6、A的表達(dá)水平比加力時間為6小時的基因表達(dá)水平下降（F=23.151，P＜0.05），表明隨著加力時間的延長，細(xì)胞α-actinmRNA的表達(dá)水平隨著下降。且加力時間和加力強(qiáng)度存在著交互作用（F=12.908，P＜0.05），在加力時間24小時和加力強(qiáng)度6%的條件下，細(xì)胞的α-actinmRNA的表達(dá)水平下降最明顯。
　　結(jié)論
　　本實驗發(fā)現(xiàn)盆底肛提肌細(xì)胞受到機(jī)械拉伸刺激后，細(xì)胞形態(tài)、超微結(jié)構(gòu)及骨架蛋白基因表達(dá)水平發(fā)生一系列改