大負(fù)荷運(yùn)動(dòng)及恢復(fù)期間大鼠骨骼肌骨架蛋白Nebulin和Vimentin及超微結(jié)構(gòu)的變化.pdf

1、目的：研究大負(fù)荷運(yùn)動(dòng)及恢復(fù)期大鼠骨骼肌骨架蛋白Nebulin及Vimentin及超微結(jié)構(gòu)的變化。
　　 方法：以36只6周齡健康雄性SD大鼠為研究對(duì)象。將其隨機(jī)分為6組，每組6只：A，安靜對(duì)照組(Control)；B，力竭運(yùn)動(dòng)即刻組(E0)；C，力竭運(yùn)動(dòng)后12h組(E12)；D，力竭運(yùn)動(dòng)后24h組(E24)；E，力竭運(yùn)動(dòng)后48h組(E48)；F，力竭運(yùn)動(dòng)后72h組(E72)。各力竭運(yùn)動(dòng)組進(jìn)行為期一周的負(fù)重力竭性游泳運(yùn)動(dòng)，并于末次

2、力竭運(yùn)動(dòng)后的不同時(shí)間點(diǎn)宰殺取樣。所有大鼠用烏拉坦腹腔麻醉、宰殺后迅速取腓腸肌、比目魚肌、股外側(cè)肌、股直肌，部分液氮冷凍保存待用，另一部分分別用4％多聚甲醛或2.5％戊二醛固定。采用SABC-DAB免疫組化方法檢測(cè)大鼠比目魚肌和股外側(cè)肌中骨架蛋白Nebulin和Vimentin蛋白表達(dá)，并用圖像分析儀對(duì)免疫染色切片進(jìn)行定量分析。取股直肌樣本制作電鏡超薄切片，透射電子顯微鏡下觀察骨骼肌的超微結(jié)構(gòu)變化。
　　 結(jié)果：
　　 (

3、1)免疫組化結(jié)果顯示，大負(fù)荷運(yùn)動(dòng)后，E0組股外側(cè)肌vimentin和nebulin染色程度明顯加深，而且陽性范圍明顯增大，不僅分布于胞漿中，還分布于細(xì)胞周圍的結(jié)締組織，以及小血管的周圍及內(nèi)部；運(yùn)動(dòng)后E12組，vimentin和nebulin表達(dá)強(qiáng)度明顯低于運(yùn)動(dòng)后即刻組(P＜0.05)，但仍明顯高于對(duì)照組；運(yùn)動(dòng)后E24組的染色范圍更大，但染色程度比運(yùn)動(dòng)后即刻和運(yùn)動(dòng)后12組稍淺。E48組染色范圍和運(yùn)動(dòng)后E24組范圍相近，胞漿，細(xì)胞周圍以有小

4、血管分布處都有表達(dá)，尤其在個(gè)別壞死細(xì)胞處整個(gè)細(xì)胞區(qū)域都有表達(dá)，表達(dá)程度比前面幾組都要淺。運(yùn)動(dòng)后E72組陽性范圍明顯增大，染色逐漸減淡。比目魚肌的結(jié)果與股外側(cè)肌相似。
　　 (2)大鼠股外側(cè)肌、比目魚肌免疫組化結(jié)果均顯示，vimentin和nebulin圖像分析系統(tǒng)統(tǒng)計(jì)結(jié)果基本相似。對(duì)照組無論是平均光密度值還是陽性目標(biāo)面積都較少。E0組大鼠骨骼肌vimentin和nebulin表達(dá)的平均光密度值最高，說明此時(shí)表達(dá)信號(hào)最強(qiáng)；E12組

5、表達(dá)強(qiáng)度明顯低于運(yùn)動(dòng)后E0組(P＜0.05)，但仍明顯高于C組(P＜0.05)；運(yùn)動(dòng)后24、48組表達(dá)強(qiáng)度低于運(yùn)動(dòng)后12組，但差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，E72組顯色最淡。
　　 另外，運(yùn)動(dòng)后所有時(shí)相的vimentin和nebulin陽性面積百分比PSA都明顯高于對(duì)照組。E24組大鼠骨骼肌中PSA最高。從各組平均光密度值和陽性面積來看，E0組平均光密度最大，以后逐漸減少。而陽性表達(dá)面積從運(yùn)動(dòng)后即刻開始逐漸遞增，E24、E48組的陽性表達(dá)

6、面積較大，PSA最高值在E24組，表明運(yùn)動(dòng)后不同時(shí)間點(diǎn)vimentin和nebulin的表達(dá)都有不同程度的增加。
　　 (3)通過觀察安靜對(duì)照組和E0組、E24組股直肌電鏡照片發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組的骨骼肌呈正常的超微結(jié)構(gòu)，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及線粒體均清晰可見，細(xì)胞核呈正常結(jié)構(gòu)，肌原纖維排列整齊規(guī)則，H帶、I帶、M線及Z線界限清晰，基質(zhì)內(nèi)有少許空泡。力竭運(yùn)動(dòng)組(E0、E24)骨骼肌結(jié)構(gòu)明顯遭受破壞，具體表現(xiàn)細(xì)胞間質(zhì)水腫、肌間隙增寬，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體可見

7、有輕度變形，細(xì)胞核及核膜保存尚好；肌原纖維疏松變細(xì)，H帶、I帶界限不清，M線、Z線模糊，出現(xiàn)Z線扭曲、消失，部分基質(zhì)變淺，力竭運(yùn)動(dòng)組可明顯看出線粒體變形、扭曲、腫大。
　　 結(jié)論：
　　 (1)大負(fù)荷運(yùn)動(dòng)后大鼠骨骼肌肌纖維免疫組化結(jié)果顯示，Nebulin和Vimentin染色程度及陽性范圍均不同程度、不同范圍地出現(xiàn)了增加，在運(yùn)動(dòng)后即刻達(dá)峰值，表明細(xì)胞骨架蛋白nebulin和vimentin是骨骼肌運(yùn)動(dòng)性微損傷的敏感形態(tài)學(xué)

8、指標(biāo).
　　 (2)vimemin和nebulin免疫組化圖像分析系統(tǒng)統(tǒng)計(jì)結(jié)果，二者基本相似。與對(duì)照組相比，力竭運(yùn)動(dòng)后Nebulin和Vimentin平均光密度及陽性面積百分比均顯著升高，平均光密度在力竭后即刻較高，但陽性面積百分比最高點(diǎn)出現(xiàn)在運(yùn)動(dòng)后24小時(shí)。表明運(yùn)動(dòng)后不同時(shí)間點(diǎn)vimentin和nebulin的表達(dá)都有不同程度的增加。
　　 (3)大鼠股直肌電鏡下觀察結(jié)果顯示，一周大負(fù)荷游泳運(yùn)動(dòng)能夠引起骨骼肌超微結(jié)構(gòu)較