鉬對小鼠腎小管和骨骼肌損傷及細(xì)胞骨架蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：中國洛陽作為亞洲重要鉬礦開采地，富含大量鉬元素的土壤會對當(dāng)?shù)氐哪敛?、家畜產(chǎn)生一定的影響，并且通過食物鏈的富集作用引起動物Mo中毒，因此研究Mo對動物的影響就顯得尤為必要。鉬作為動物體必需的微量元素，在動物機(jī)體的生長和代謝過程中發(fā)揮著重要的作用。機(jī)體攝入過量的鉬可導(dǎo)致鉬中毒的發(fā)生，從而對動物體的免疫功能、泌尿功能和生殖功能等造成損傷。目前，國內(nèi)外關(guān)于鉬中毒的研究主要集中于動物體的免疫和生殖系統(tǒng)的研究，而關(guān)于 Mo對體外培養(yǎng)小鼠骨骼肌

2、細(xì)胞（SMC）和腎小管上皮細(xì)胞（RTEC）的毒性影響卻未見報道。
　　方法：本試驗選用3日齡健康小鼠，無菌取出小鼠腎臟和骨骼肌組織進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng)，待細(xì)胞生長穩(wěn)定后，向細(xì)胞添加含Mo無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h， Mo的最終濃度分別為0、0.1、0.2、0.4、0.8 mmol/L。倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化；MTT法測定 Mo對細(xì)胞活力的影響；用試劑盒測定細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、丙二醛（MDA）、總抗氧

3、化能力（T-AOC），同時測定培養(yǎng)基內(nèi)乳酸脫氫酶（LDH）含量；采用實時熒光定量 PCR技術(shù)，對骨架蛋白α-肌動蛋白（α-actin）、β-肌動蛋白（β-actin）和波形蛋白（Vimentin）mRNA的表達(dá)進(jìn)行測定；采用免疫印記技術(shù)（Western Blot），對骨架蛋白α-actin、β-actin和 Vimentin蛋白含量的變化進(jìn)行測定。
　　結(jié)果：1.通過細(xì)胞形態(tài)觀察得出，當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)基中鉬濃度為0.4、0.8 mmol

4、/L時會導(dǎo)致小鼠腎小管上皮細(xì)胞間隙增大，且細(xì)胞生長緊縮且細(xì)長，輪廓逐漸模糊，少數(shù)細(xì)胞出現(xiàn)畸形；當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)基中 Mo濃度為0.2、0.4、0.8 mmol/L時會導(dǎo)致小鼠骨骼肌細(xì)胞生長緩慢，細(xì)胞間隙增大，且細(xì)胞形狀隨 Mo濃度的升高，細(xì)胞凸起、輪廓明顯，并有少量細(xì)胞出現(xiàn)畸形。
　　2.細(xì)胞培養(yǎng)基中鉬濃度為0.8mmol/L時，小鼠腎小管上皮細(xì)胞和骨骼肌細(xì)胞的活力明顯受到抑制。
　　2.細(xì)胞培養(yǎng)基中鉬濃度為0.4、0.8mmol

5、/L時，可以引起小鼠腎小管上皮細(xì)胞和骨骼肌細(xì)胞的抗氧化能力下降，受到氧化損傷。
　　3.細(xì)胞培養(yǎng)基中鉬濃度為0.8mmol/L時，原代小鼠腎小管上皮細(xì)胞和骨骼肌細(xì)胞骨架蛋白α-actin，β-actin，Vimentin mRNA和蛋白合成受到抑制。
　　結(jié)論：本試驗從細(xì)胞形態(tài)學(xué)、氧化損傷和細(xì)胞骨架損傷方面，初步探討了鉬中毒對于骨骼肌細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞的損傷機(jī)理，證實了高劑量的 Mo能夠引起小鼠腎小管上皮細(xì)胞和骨骼肌細(xì)胞氧