大鼠腦外傷后血腦屏障、超微結(jié)構(gòu)變化及VEGF表達(dá)的研究.pdf

1、目的 血腦屏障(bloodbrainbarrier，BBB)是機(jī)體維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)研究大鼠腦外傷后BBB變化規(guī)律和開放途徑及VEGF-A與BBB關(guān)系。方法參照Feeney's自由落體致傷法，制作大鼠大腦頂葉局灶皮質(zhì)挫裂傷模型。第一部分應(yīng)用伊文氏蘭((EvansBlue，EB)示蹤，測(cè)定傷后1小時(shí)、3小時(shí)、6小時(shí)、12小時(shí)、1天、、3天、5天、7天、10天皮層和海馬組織腦組織中EB含量；應(yīng)用熒光顯微鏡觀察BBB

2、中間期雙側(cè)皮層和海馬是否存在EB的滲出；應(yīng)用硝酸鑭示蹤，在透射電鏡下觀察大鼠腦外傷后3小時(shí)，12小時(shí)，3天雙側(cè)海馬區(qū)血管和內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)水平的功能改變；第二部分采用免疫組化和免疫熒光的方法，應(yīng)用VEGF-A，GFAP抗體檢測(cè)傷后不同時(shí)間段大鼠腦冰凍切片。取傷后不同時(shí)間段損傷灶周圍和同側(cè)海馬做VEGF-A實(shí)時(shí)反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Real-timeRT-PCR)。結(jié)果①損傷灶皮層和同側(cè)海馬在傷后1-6小時(shí)與傷后1-7天EB含量明顯增多，高

3、峰期在3小時(shí)和3天。傷后12小時(shí)，EB含量明顯下降，但仍然高于對(duì)照組水平。損傷灶皮層和同側(cè)海馬EB含量分別在傷后10天和7天恢復(fù)正常。損傷灶皮層傷后3小時(shí)EB含量高于傷后3天。損傷灶同側(cè)海馬EB含量和傷后3小時(shí)相比沒有差異。損傷灶對(duì)側(cè)皮層和對(duì)側(cè)海馬EB含量和對(duì)照組相比沒有差別。熒光顯微鏡下發(fā)現(xiàn)BBB中間期損傷灶同側(cè)海馬仍然存在EB的滲出。②傷后3小時(shí)和3天損傷同側(cè)海馬血管無(wú)斷裂，硝酸鑭擴(kuò)散入血管周圍組織間隙、血管基膜與膠質(zhì)膜外以至組織間

4、隙內(nèi)，可見內(nèi)皮細(xì)胞有胞飲小泡、微絨毛和指狀突起形成。傷后12小時(shí)的損傷灶同側(cè)海馬區(qū)血管周圍組織間隙仍有硝酸鑭存在，但內(nèi)皮細(xì)胞胞飲小泡、微絨毛的數(shù)量和形態(tài)較開放期明顯減弱，未見指狀突起形成。③免疫組化顯示傷后1天，在皮質(zhì)損傷灶周圍和同側(cè)海馬出現(xiàn)表達(dá)VEGF-A細(xì)胞漿陽(yáng)性細(xì)胞增多，VEGF-A和GFAP熒光雙標(biāo)顯示這些細(xì)胞是膠質(zhì)細(xì)胞。這些細(xì)胞在背離創(chuàng)傷灶的地方逐漸減少，緊鄰創(chuàng)傷灶邊緣最為密集，在海馬區(qū)彌漫出現(xiàn)。傷后3天達(dá)到高峰期，然后逐漸下

5、降，傷后10天基本上沒有VEGF陽(yáng)性的膠質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)。這兩個(gè)部位的VEGF-AmRNA在傷后12小時(shí)開始增多，傷后3天達(dá)到高峰期。結(jié)論①大鼠頂葉局部腦挫裂傷后損傷灶皮層和同側(cè)海馬BBB開放呈雙相性變化，BBB開放中間期仍然有很少量EB滲出，真正零通透率的BBB中間閉合期是不存在的。②損傷同側(cè)海馬在BBB開放期BBB開放途徑是內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接開放，內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)能力增強(qiáng)。損傷灶同側(cè)海馬BBB中間期仍有存在內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接開放，但內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)功