HIF-1α促進(jìn)甲狀腺乳頭狀癌和未分化癌侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究低氧誘導(dǎo)因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α)對(duì)甲狀腺乳頭狀癌和甲狀腺未分化癌侵襲轉(zhuǎn)移的影響，并初步探討HIF-1α及其下游分子蛋白鋅指轉(zhuǎn)錄因子(Snail)、上皮細(xì)胞鈣粘蛋白（E-cadherin）、間質(zhì)細(xì)胞波形蛋白(Vimentin)和基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP2)在其中的作用及相關(guān)性。
　　方法：用5％ O2的低氧培養(yǎng)箱培養(yǎng)甲狀腺未分化癌FRO細(xì)胞不同時(shí)間（0h、2h、4h

2、、8h和12h），在倒置顯微鏡下觀察其細(xì)胞形態(tài)的改變，用Western blotting法檢測(cè)各組細(xì)胞中HIF-1僅、Snail、E-cadherin、Vimentin、MMP2的蛋白表達(dá);將FRO細(xì)胞分為正常氧組、YC-1+常氧組、低氧組、YC-1+低氧組和常氧+CoCl2組，用Western blotting法檢測(cè)各組中HIF-1α、Snail、E-cadherin、Vimentin和MMP2蛋白的表達(dá);用Transwell侵襲和遷

3、移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)以上5組中細(xì)胞侵襲和遷移能力的變化。用免疫組化SP法，檢測(cè)83例人甲狀腺乳頭狀癌組織中HIF-1α、Snail、E-cadherin和MMP2的表達(dá)情況;將甲狀腺乳頭狀癌NPA細(xì)胞在5％O2的低氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12h后，用Western blotting方法檢測(cè)其HIF-1α、Snail、E-cadherin和MMP2的表達(dá);用Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)低氧處理12h組與常氧組NPA細(xì)胞侵襲能力的改變。
　　結(jié)果：隨著

4、低氧處理時(shí)間的延長(zhǎng)，可觀察到FRO細(xì)胞逐漸發(fā)生間質(zhì)樣細(xì)胞的改變; HIF-1α、Snail、Vimentin和MMP2的蛋白表達(dá)呈時(shí)間依賴性增高，低氧處理12h達(dá)到最高，且低氧12h組較0h組顯著增多(P＜0.01);上皮細(xì)胞特征性蛋白E-cadherin的表達(dá)量持續(xù)減少(P＜0.01);低氧組和常氧+CoCl2組中FRO細(xì)胞HIF-1α、Snail、Vimentin、MMP2蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組明顯增多（P＜0.05），E-cadhe

5、rin表達(dá)則明顯減少（P＜0.05）;低氧組和常氧+CoCl2組轉(zhuǎn)移和遷移細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組均顯著增多(P＜0.01)。在83例甲狀腺乳頭狀癌組織中，HIF-1α、Snail、E-cadherin和MMP2的陽性率分別為71.08％(59/83)、66.27％(55/83)、44.58％(37/83)和口73.49％(61/83);HIF-1α、Snail、E-cadherin和MMP2的表達(dá)與腫瘤直徑和年齡無關(guān)，與TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相

6、關(guān)(P＜0.05); HIF-1α與Snail呈正相關(guān)(r=0.276 P＜0.05)，Snail與E-cadherin呈負(fù)相關(guān)(r=-0.431 P＜0.01)，HIF-1α和Snail分別與MMP2均呈顯著正相關(guān)(r=0.368 P＜0.01; r=0.220 P＜0.05);NPA細(xì)胞經(jīng)過5％O2的低氧處理12h后，其HIF-1α、Snail和MMP2的表達(dá)較常氧組顯著增多（P＜0.01），E-cadherin表達(dá)較常氧組減少（P

7、＜0.05）;NPA細(xì)胞低氧組較常氧組細(xì)胞侵襲能力顯著增強(qiáng)。
　　結(jié)論：在5％O2低氧條件下，HIF-1α在甲狀腺乳頭狀癌NPA細(xì)胞和甲狀腺未分化癌FRO細(xì)胞中表達(dá)增多，并且促進(jìn)NPA細(xì)胞和FRO細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移，其分子機(jī)制可能是HIF-1α上調(diào)Snail、Vimentin和MMP2的表達(dá)，下調(diào)E-cadherin的表達(dá)。甲狀腺乳頭狀癌組織中HIF-1α、Snail、MMP2和E-cadherin的表達(dá)與其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，推測(cè)H