雌激素介導(dǎo)的Aquaporin2在女性壓力性尿失禁患者尿道支撐組織成纖維細(xì)胞上的表達(dá)和意義.pdf

1、背景和目的:
　　壓力性尿失禁(stress urinary incontinence，SUI)是中老年婦女常見慢性病，是指在腹壓增加時，出現(xiàn)不自主的尿液自尿道外口溢出。SUI的病因很復(fù)雜，年齡是其發(fā)病的主要誘因之一，但是發(fā)病機(jī)制迄今未明，最經(jīng)典的“整體理論”和“吊床假說”均強(qiáng)調(diào)尿道支撐結(jié)構(gòu)薄弱導(dǎo)致SUI的發(fā)生。尿道支撐結(jié)構(gòu)由大量細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)和少量成纖維細(xì)胞等組成。有研究表明ECM

2、重構(gòu)障礙是SUI發(fā)病的關(guān)鍵因素，而雌激素直接參與了ECM的重構(gòu)過程。水通道蛋白(Aquaporins AQPs)是選擇性高效轉(zhuǎn)運(yùn)水分子的通道，同時還廣泛參與人體細(xì)胞的遷移運(yùn)動，與多種組織的損傷修復(fù)有關(guān)，而且有研究發(fā)現(xiàn)在水通道蛋白2(Aquaporin2，AQP2)的基因上存在雌激素的反應(yīng)元件，證實(shí)了雌激素能直接調(diào)控AQP2的基因轉(zhuǎn)錄而調(diào)節(jié)其在子宮內(nèi)膜細(xì)胞上的表達(dá)，從而促進(jìn)內(nèi)膜細(xì)胞的遷移、入侵、粘附及增殖。本研究擬通過原代培養(yǎng)獲得女性尿道

3、支撐組織成纖維細(xì)胞，采用免疫熒光技術(shù)證實(shí)AQP2在尿道支撐組織成纖維細(xì)胞上的表達(dá)，采用Western blot法觀測絕經(jīng)前后SUI患者與非SUI患者尿道支撐組織成纖維細(xì)胞上AQP2的表達(dá)差異，探討AQP2在SUI發(fā)生發(fā)展中的作用;同時，通過測定血清雌二醇（estradiol，E2）水平，探討尿道支撐組織成纖維細(xì)胞上AQP2的表達(dá)水平與血清E2水平的相關(guān)性。
　　方法:
　　收集浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院2013年1月至20

4、14年3月收治的18例SUI患者（SUI組）和18例非壓力性尿失禁婦女（對照組）的陰道前壁組織（即尿道支撐組織），每組再分為絕經(jīng)前后兩組各9例，所有組織標(biāo)本來源于SUI患者行抗尿失禁手術(shù)時和非SUI患者因尿道旁腺囊腫、尿道憩室、尿道附近陰道壁囊腫等疾病手術(shù)時，取材于尿道附近約0.5×1cm2的陰道前壁全層組織。取組織塊進(jìn)行成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)，并予免疫組化鑒定。采用免疫熒光法測定成纖維細(xì)胞上AQPs各亞型的表達(dá)，采用Western blo

5、t法檢測成纖維細(xì)胞上AQP2蛋白表達(dá)水平，比較絕經(jīng)前后SUI組和非SUI組之間尿道支撐組織成纖維細(xì)胞上AQP2蛋白表達(dá)水平的差異。
　　所有36例入選對象均在外科手術(shù)前一天早晨7時空腹采靜脈血2ml，采用電化學(xué)發(fā)光免疫檢測(ECLIA)法檢測血清E2水平，采用Pearson相關(guān)性分析法探討尿道支撐組織成纖維細(xì)胞上AQP2蛋白表達(dá)水平與血清E2水平之間的相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　　1.免疫熒光技術(shù)和Western blot

6、法均發(fā)現(xiàn)女性尿道支撐組織成纖維細(xì)胞上有AQP2的表達(dá);
　　2.經(jīng)t檢驗(yàn)，絕經(jīng)前后SUI組和對照組的年齡、分娩次數(shù)、體重指數(shù)以及絕經(jīng)后SUI組和對照組的絕經(jīng)年限差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;絕經(jīng)前血清E2水平SUI組(311.43±93.63 nmol/L)顯著低于對照組(530.30±232.21 nmol/L)(P＜0.05）。絕經(jīng)后血清E2水平SUI組為39.91±16.76nmol/L，對照組為31.30±9.95 nmol/L，兩

7、組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);經(jīng)相關(guān)性分析，血清E2水平與所有標(biāo)本尿道支撐組織成纖維細(xì)胞(r=-0.537，P＜0.05)及總的SUI組標(biāo)本尿道支撐組織成纖維細(xì)胞(r=-0.860，P＜0.05)上AQP2的表達(dá)水平均存在顯著的負(fù)相關(guān)，而與總的對照組標(biāo)本尿道支撐組織成纖維細(xì)胞上AQP2的表達(dá)水平無顯著相關(guān)（P＞0.05）。
　　3.經(jīng)Western blot法檢測，絕經(jīng)前后SUI組及絕經(jīng)前后對照組尿道支撐組織成纖維細(xì)胞上

8、均有AQP2的表達(dá)，總的SUI組和總的對照組尿道支撐組織成纖維細(xì)胞上AQP2的蛋白表達(dá)水平分別為26.29±2.53和25.32±3.80，t檢驗(yàn)顯示兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);總的絕經(jīng)前組和總的絕經(jīng)后組尿道支撐組織成纖維細(xì)胞上AQP2的蛋白表達(dá)水平分別為23.25±2.40和28.36±1.31，經(jīng)t檢驗(yàn)，總的絕經(jīng)后組尿道支撐組織成纖維細(xì)胞上AQP2的表達(dá)明顯升高(P＜0.05)。絕經(jīng)前SUI組和絕經(jīng)后SUI組尿道支撐組織

9、成纖維細(xì)胞上AQP2的蛋白表達(dá)水平分別為24.03±0.98和28.54±1.11，絕經(jīng)前對照組和絕經(jīng)后對照組尿道支撐組織成纖維細(xì)胞上AQP2的蛋白表達(dá)水平分別為22.46±3.15和28.19±1.54，經(jīng)t檢驗(yàn)，絕經(jīng)前SUI組與絕經(jīng)前對照組、絕經(jīng)后SUI組與絕經(jīng)后對照組上的表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）;絕經(jīng)后SUI組尿道支撐組織成纖維細(xì)胞上AQP2的表達(dá)較絕經(jīng)前SUI組上的表達(dá)明顯升高，兩組間的比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜