低氧誘導(dǎo)因子-1α在良性氣道狹窄肉芽組織成纖維細(xì)胞的表達.pdf

1、良性氣道狹窄是指氣管由多種良性疾病(如感染及外傷、復(fù)發(fā)性多軟骨炎等疾病)導(dǎo)致氣道狹窄的一類疾病疾病。隨著呼吸生命支持如氣管插管/氣管切開在危重癥及呼吸衰竭患者搶救過程的普及應(yīng)用，氣道狹窄的發(fā)生率逐漸增高，并成為呼吸介入領(lǐng)域的多發(fā)疾病。目前因氣道狹窄機制仍不明確，目前僅通過支氣管鏡下冷凍、激光等介入治療及外科手術(shù)切除病變組織，但手術(shù)切除病變組織后患者仍有較高的再狹窄的發(fā)生率,目前治療只能短期內(nèi)緩解患者氣道狹窄，仍有肉芽組織等形成導(dǎo)致氣道再

2、次狹窄，因此研究良性氣道狹窄的形成機制具有重要意義。關(guān)于良性氣道狹窄形成最近研究發(fā)現(xiàn)，氣管粘膜的損傷破壞了局部粘膜血液循環(huán)，從而導(dǎo)致粘膜缺血和低氧產(chǎn)生，隨后形成粘膜糜爛、潰瘍和氣管軟骨炎。低氧誘導(dǎo)因子1( hypoxia inducible factor-1, HIF-1)是哺乳動物和人體細(xì)胞內(nèi)存在的，組織為適應(yīng)缺氧環(huán)境而發(fā)生反應(yīng)的一類關(guān)鍵保護性轉(zhuǎn)錄因子。低氧條件下可與靶基因的缺氧應(yīng)答原件結(jié)合，從而激活靶基因的轉(zhuǎn)錄，包括血管內(nèi)皮生長因子

3、(Vascular endothelial growth factor, VEGF)、轉(zhuǎn)化生長因子β(transforming growth factor, TGF-β)等，這些靶基因參與細(xì)胞的血管新生、糖代謝、細(xì)胞生存及凋亡等。本研究目的是從細(xì)胞水平觀察HIF-1α及其靶基因在成纖維細(xì)胞的表達，為今后體外研究HIF-1α在良性氣道狹窄形成機制中作用做基礎(chǔ)。
　　目的：探討HIF-1α及下游靶基因良性氣管狹窄患者肉芽組織中成纖維細(xì)

4、胞的表達。
　　方法：⑴利用組織切片HE染色方法對良性氣道狹窄病理組織進行鑒定。⑵利用組織塊培養(yǎng)方法分離培養(yǎng)良性氣管狹窄的患者的肉芽組織成纖維細(xì)胞，倒置顯微鏡下進行形態(tài)觀察，用HE染色及免疫組化方法進行鑒定。⑶利用免疫熒光檢測HIF-1α及相關(guān)靶基因在成纖維細(xì)胞的表達。
　　結(jié)果：①病理切片鏡下可見：大量新生的毛細(xì)血管，平行排列，均與表面相垂直，并在近表面處互相吻合形成弓狀突起，肉眼呈鮮紅色細(xì)顆粒狀。新增生的纖維母細(xì)胞散在分

5、布于毛細(xì)血管網(wǎng)絡(luò)之間，很少有膠原纖維形成。多少不等的炎性細(xì)胞浸潤其中。②倒置顯微鏡下觀察貼壁細(xì)胞為典型的長梭形，其胞體較大，細(xì)胞界限清楚，立體感強，折光性高。③HE染色示細(xì)胞和細(xì)胞核較大，輪廓清楚，核仁大而明顯，細(xì)胞質(zhì)弱嗜堿性。④免疫組化結(jié)果顯示細(xì)胞波形蛋白染色呈陽性，胞漿內(nèi)見大量棕黃色顆粒，核為藍色。⑤免疫熒光示HIF-1α及下游靶基因TGF-β1、VEGF胞漿內(nèi)顯示紅色和綠色，提示HIF-1α及下游靶基因TGF-β1、VEGF分別成