重組人ndrg2腺病毒抗膠質(zhì)瘤體外藥效學(xué)評價(jià).pdf

1、膠質(zhì)瘤是原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最常見的腫瘤類型,約占所有顱內(nèi)腫瘤的45％。多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤是最常見的、惡性的星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤。盡管手術(shù)、放療和化療手段有所提高,病人的中位生存期卻無明顯增加。由于膠質(zhì)瘤其浸潤性生長的特性,它和正常腦組織無明顯的分界,手術(shù)治療難以達(dá)到完全切除病灶的目的,因此常常會導(dǎo)致腫瘤的復(fù)發(fā)。常規(guī)的化學(xué)療法因血腦屏障和藥物抵抗等因素的影響,療效也不十分理想,因此腦膠質(zhì)瘤預(yù)后很差。它具有病程短,進(jìn)展快,生存期短,復(fù)發(fā)率高的特

2、點(diǎn),病人從診斷到死亡平均生存期約12~18個(gè)月,五年存活率<10%。近年來隨著分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)的不斷發(fā)展,利用基因治療膠質(zhì)瘤成為了新的研究熱點(diǎn)。
　　目前分子靶向治療主要集中在以下四個(gè)方面:針對抑癌基因和原癌基因開發(fā)基因治療藥物來促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡;導(dǎo)入細(xì)胞毒性藥物來增強(qiáng)放化療的治療效果;導(dǎo)入血管形成抑制因子阻止腫瘤血管的生長和腫瘤細(xì)胞的侵襲;激活病人的免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)產(chǎn)生自身抗腫瘤效應(yīng)并且防止腫瘤的復(fù)發(fā)。在抑癌基因研究方面腺病毒介

3、導(dǎo)的p53治療膠質(zhì)瘤的I期臨床試驗(yàn)中,Lang等人發(fā)現(xiàn):在所有的病人中,瘤內(nèi)注射含p53的腺病毒載體都導(dǎo)致了p53基因的轉(zhuǎn)錄和功能性外源性p53的表達(dá)。其研究發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染了的細(xì)胞僅存在于注射部位附近,也就是說并沒有系統(tǒng)性的病毒播散。人ndrg2基因最早是由鄧艷春教授利用錨定引物從正常成人全腦cDNA文庫中發(fā)現(xiàn)并克隆到的,于2000年1月被Genbank收錄,登錄號為AF159092。ndrg2有兩個(gè)亞型,即ndrg2L(基因全長2066bp

4、)和ndrg2S(基因全長2024bp),分別編碼371個(gè)氨基酸(41kDa)和357個(gè)氨基酸。這兩種NDRG2蛋白都屬于ABH超家族。
　　目前的研究顯示NDRG2可通過分子間的相互作用參與細(xì)胞的多種生物學(xué)功能,包括應(yīng)激反應(yīng)、分化、增殖和凋亡。它的表達(dá)與多種疾病相關(guān)聯(lián):在阿爾茨海默病人的腦組織中NDRG2蛋白質(zhì)表達(dá)顯著提高;在老年性白內(nèi)障患者的晶狀體上皮細(xì)胞中NDRG2的表達(dá)在mRNA水平和蛋白質(zhì)水平也均有所上調(diào)。這提示NDRG

5、2可能與多種疾病的發(fā)生發(fā)展相關(guān)聯(lián)。NDRG2的表達(dá)降低還與多種腫瘤相關(guān),例如乳腺癌、肝癌、胃癌、皮膚癌等。近期的多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)證明NDRG2在體外和體內(nèi)通過調(diào)控各種不同的細(xì)胞因子來抑制腫瘤細(xì)胞的生長和侵襲,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡。多種癌癥的不良預(yù)后與NDRG2的低表達(dá)相關(guān)。因此將ndrg2定位成一個(gè)抑癌基因,并將它看作是腫瘤預(yù)后判斷的生物標(biāo)志。前期試驗(yàn)中研究小組已經(jīng)成功構(gòu)建了表達(dá)NDRG2長短兩個(gè)蛋白的重組腺病毒。膠質(zhì)瘤細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn)證明,這二者均

6、有抑瘤作用,但二者在抑制腫瘤細(xì)胞生長、抗增殖、克隆形成能力并無顯著差異。為觀察該重組腺病毒的體外抗腦膠質(zhì)瘤的藥效作用,本試驗(yàn)選用了三株不同膠質(zhì)瘤細(xì)胞株(人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞A172、U251和SHG-44)進(jìn)行體外藥效學(xué)試驗(yàn),并與同類藥物今又生(重組人p53腺病毒注射液)的療效進(jìn)行比較,以期尋找其敏感細(xì)胞株及有效濃度,為下一步的體內(nèi)藥效學(xué)評價(jià)提供理論依據(jù)。實(shí)驗(yàn)首先擴(kuò)增并純化了重組人ndrg2腺病毒(pAd-CMV/V5-DEST-ndrg2S

7、),western blot結(jié)果證明重組人ndrg2腺病毒感染的HEK293細(xì)胞能夠正確表達(dá)NDRG2蛋白。實(shí)驗(yàn)檢測其TCID50/mL為:2.5×1010IU/ml。對三株膠質(zhì)瘤細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),用western blot檢測其NDRG2表達(dá);MTT法檢測重組人ndrg2腺病毒和今又生對這三株膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖抑制作用。
　　結(jié)果表明，三株膠質(zhì)瘤細(xì)胞ndrg2均為低表達(dá);重組人ndrg2腺病毒和今又生兩種藥物對三株膠質(zhì)瘤細(xì)胞均表現(xiàn)出明

8、顯的增殖抑制作用,隨著病毒濃度的增大,其對細(xì)胞生長抑制作用增強(qiáng)。其中重組人ndrg2腺病毒和今又生對膠質(zhì)瘤細(xì)胞A172和SHG-44的增殖抑制作用基本相同,在最大濃度1.68×1011v.p/ml時(shí)這二者對A172的抑制率接近100%;在膠質(zhì)瘤細(xì)胞SHG-44中,在最大濃度1.68×1011v.p/ml下,重組人ndrg2腺病毒對其抑制率為73%,而今又生的抑制率為50%;對膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251的增殖抑制作用中,重組人ndrg2腺病毒抑制