骨髓增生異常綜合征腫瘤標志物及相關分子生物學機制的研究.pdf

1、本研究分為三部分：
　　第一部分、應用蛋白質芯片技術研究骨髓增生異常綜合征腫瘤相關標志物
　　骨髓增生異常綜合征(MDS)是一類異質性較高的疾病。部分患者可在發(fā)病后1年內(nèi)即轉變成急性白血病(AML)，這里稱之為tMDS(transformedMDS)；而另一些患者則可長期保持穩(wěn)定而不進展為AML，稱作sMDS(stable MDS)。Kunju等人(2009)對MDS骨髓CD34+細胞的cDNA芯片研究中顯示，這兩組預后不同

2、的MDS患者具有不同的基因表達譜(GEP)特點。而作為一種高通量的蛋白質研究技術，蛋白質芯片在研究腫瘤標志物方面已經(jīng)有很多成功的應用。
　　在本研究中，我們首次應用人蛋白質芯片對MDS患者血漿中相對于正常對照組異常表達的蛋白質進行較為全面的檢測。我們檢測了64個MDS樣本，其中包括28名tMDS患者和36名sMDS患者，還檢測了13個轉白(AML post-MDS)樣本，正常對照樣本為34個，共111個血漿樣本。所有樣本均通過與包

3、含有9483個人類蛋白質的芯片雜交而進行檢測。所得的數(shù)據(jù)通過應用ProCAT算法和quantile校正進行芯片內(nèi)部和芯片之間的校正和標準化。然后再對數(shù)據(jù)進行非參數(shù)假設檢驗，得出了相對于正常對照組有顯著差異的蛋白質/蛋白質組(p<0.01)。sMDS組有36個反應性顯著增高的蛋白，其中4個也出現(xiàn)于tMDS中(如ARL8，PLK1)，2個還出現(xiàn)于AML/MDS中（如FGF16）；在tMDS組有8個反應性顯著增高的蛋白質，其中4個也出現(xiàn)于sM

4、DS中，2個可見于AML/MDS中(如LGALS1); AML/MDS組有5個反應性增高較為顯著的蛋白質，其中與sMDS和tMDS表現(xiàn)重合的各為2個。例如，在tMDS組，DLEU（抑癌因子，促進細胞凋亡，抑制細胞增殖）和ARL8（ADP糖基化因子樣蛋白8，促進細胞增殖）具有較高的顯著性；在sMDS組中可見AKT3(絲/蘇氨酸蛋白激酶家族成員，促增殖因子)和BAG1（原癌基因BCL-2的分子伴侶，具有抗凋亡作用）顯著升高；而在AML/MD

5、S中有FGF16（成纖維細胞生長因子16，促增殖因子）表現(xiàn)為顯著升高。
　　這些蛋白質參與體內(nèi)許多生物過程，如細胞凋亡、細胞間信號轉導等等。一些高表達的蛋白質中有一部分與cDNA芯片的結果一致（如AKT3和FGF16）。而且，這些蛋白標志物與IPSS評分也顯示出很高的相關性。我們的實踐表明蛋白質芯片技術是MDS腫瘤血漿標志物研究的有力工具，在研究中我們篩選出MDS患者血漿中一些潛在的腫瘤標志物及疾病進展相關標志物。這對于促進MDS

6、患者的臨床診斷和預后判斷具有積極地意義。
　　第二部分、單純Sq-/伴5q-異常MDS患者RPS14表達水平及其與造血細胞凋亡關系
　　目的：探討Sq-核型異常的骨髓增生異常綜合征(MDS)患者核糖體蛋白(RP) S14的表達水平及與骨髓造血細胞凋亡的關系。
　　方法：采用實時定量PCR方法檢測18例單純5q-異常（7例）或Sq-伴有其他染色體異常（11例）MDS患者RPS14、MDM2、p53的mRNA表達水平，同時

7、采用堿性磷酸酶抗堿性磷酸酶(APAAP)方法檢測患者骨髓有核細胞p53蛋白表達，并同步采用TdT介導的dUTP缺口末端（熒光）標記（TUNEL）法檢測骨髓細胞凋亡，10例正常人作為對照。
　　結果：15/18例(83.3％)伴有5q-異?；颊吖撬杓毎鸕PS14表達降低，其中6/7例單純5q-異常患者表達降低，9/11例5q-伴其他核型異?；颊弑磉_降低；RPS14表達與MDM2、p53表達水平均呈正相關，而p53表達與骨髓細胞凋亡呈

8、負相關。
　　結論：Sq-/5q-伴其他核型異?；颊逺PS14表達下降，并可能通過MDM2降低p53表達導致骨髓造血細胞過度凋亡。
　　第三部分、IGF-IR作為骨髓增生異常綜合征骨髓克隆細胞相關標志物的研究
　　目的：胰島素樣生長因子I型受體(IGF-IR)具有促進細胞增殖和分化，抑制細胞凋亡的功能，在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。我們既往的研究發(fā)現(xiàn)IGF-IR在MDS骨髓有核細胞表達明顯增高，在高危組MDS的表達

9、增高更為明顯。為了進一步研究IGF-IR在MDS骨髓造血干細胞中的表達狀況及其與MDS預后的關系；以及探索IGF-IR對MDS骨髓克隆細胞的標志性作用，我們設計了本課題。
　　方法：1．在擴大病例的同時通過流式細胞術(FCM)檢測IGF-IR在MDS患者骨髓CD34+細胞中的表達狀況；2．應用免疫磁珠法對MDS患者骨髓單個核細胞進行紅系分選，對分選出的不含紅細胞的單個核細胞進行FISH檢測從而觀察去紅后單個核細胞IGF-IR表達與

10、克隆細胞的相關性；3．應用FCM進行IGF-IR陽性細胞分選，通過對陽性細胞的FISH檢測進行克隆細胞純化實驗，從而進一步證實IGF-IR在克隆細胞中的特異性表達及其對克隆細胞的純化效率。
　　結果：1．IGF-IR在MDS患者骨髓CD34+細胞中高表達，其中IPSS評分低危／中危．1(IPSS≤1)組和中危-2/高危組(IPSS≥1.5)患者的IGF-IR表達具有顯著差異(p<0.05，p=0.0128)，提示IGF-IR在MD