骨髓增生異常綜合征患者來(lái)源的成骨細(xì)胞生物學(xué)特性的研究.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:研究MDS來(lái)源的成骨細(xì)胞的生物學(xué)特性及其體外造血支持能力,探討成骨細(xì)胞在MDS發(fā)病中的作用 方法: (1)第一部分采用酶聯(lián)免疫夾心(ELISA)法檢測(cè)12例MDS患者骨髓上清液中SDF-1a水平,探討MDS骨髓微環(huán)境是否存在異常。 (2)第二部分以人成骨細(xì)胞系hFOB1.19為對(duì)象,研究成骨細(xì)胞的生物學(xué)特性,初步探討成骨細(xì)胞在造血調(diào)控中的作用。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(Flow cytometry,F(xiàn)CM)分析人成骨

2、細(xì)胞系hFOB1.19的免疫表型, RT-PCR檢測(cè)生長(zhǎng)因子的表達(dá)情況。 (3)第三部分研究MDS來(lái)源的成骨細(xì)胞的生物學(xué)特性,探討成骨細(xì)胞在MDS發(fā)病中的作用。采集MDS患者和正常供者骨髓標(biāo)本,分離、培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cell,MSC),進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、免疫表型及成纖維細(xì)胞集落(CFU-F)形成分析。取第3代MSC體外誘導(dǎo)為成骨細(xì)胞,絲裂霉素C處理后做為滋養(yǎng)層細(xì)胞。在無(wú)外源性細(xì)胞因子的條件下

3、,將經(jīng)Ficoll分離獲取的正常供者來(lái)源的單個(gè)核細(xì)胞(MNC)接種到成骨細(xì)胞上共培養(yǎng),研究成骨細(xì)胞體外支持造血祖細(xì)胞生存的作用;應(yīng)用RT-PCR在mRNA水平上分析由骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化的成骨細(xì)胞生長(zhǎng)因子的表達(dá)情況。 結(jié)果: (1)第一部分MDS難治性貧血伴有原始細(xì)胞增多(RAEB)組患者骨髓上清液中SDF-1a水平明顯低于難治性貧血(RA)+環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞性難治性貧血(RAS)組及對(duì)照組(均P<0.05)。MDS患

4、者骨髓上清液中SDF-1a水平和MDS患者骨髓原始細(xì)胞比例成負(fù)相關(guān)(r=-0.585,P=0.046),和其國(guó)際預(yù)后評(píng)分系統(tǒng)(IPSS)積分成負(fù)相關(guān)(r=-0.657,P=0.02),但和外周血中的白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板數(shù)量及血紅蛋白濃度均無(wú)明顯相關(guān)性(均P>0.05)。 (2)第二部分FCM顯示,hFOB1.19表達(dá)CD44、CD73(SH3)、CD105(SH2)及CD90(Thy1),而不表達(dá)CD34、CD45、HLA-DR等

5、造血細(xì)胞標(biāo)記;RT-PCR顯示hFOB1.19表達(dá)Oct-4、Rex-1等胚胎干細(xì)胞標(biāo)志但不表達(dá)hTERT,并經(jīng)證實(shí)具有多向分化的潛能,此外hFOB1.19還能表達(dá)SCF,IL-6,IL-11,SDF-1,GM-CSF和G-CSF等多種生長(zhǎng)因子。 (3)第三部分MDS患者M(jìn)SC在體外呈典型的成纖維樣細(xì)胞形態(tài),細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)模式與正常供者來(lái)源的MSCs無(wú)明顯差異。MDS患者和正常供者骨髓細(xì)胞的成纖維集落形成能力(CFU-F)也沒(méi)有

6、差異(P>0.05)。和MNC共培養(yǎng)后,發(fā)現(xiàn)MDS患者來(lái)源的成骨細(xì)胞在無(wú)外源性細(xì)胞因子的情況下仍能夠短期(3周)維持GM-CFC造血祖細(xì)胞的存活。MDS成骨細(xì)胞組培養(yǎng)上清中的細(xì)胞形成的CFU-GM集落數(shù)與對(duì)照組比較無(wú)明顯差異(P>0.05)。RT-PCR發(fā)現(xiàn),正常供者來(lái)源的MSC表達(dá)SCF,IL-6,IL-11,SDF-1等生長(zhǎng)因子mRNA,當(dāng)誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞時(shí)開(kāi)始表達(dá)G-CSF mRNA,但始終未見(jiàn)GM-CSF表達(dá)。MDS患者來(lái)源的

7、MSCs也能表達(dá)上述生長(zhǎng)因子的mRNA,當(dāng)誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞后開(kāi)始表達(dá)G-CSF mRNA,同樣未見(jiàn)GM-CSF表達(dá)。 結(jié)論: (1)MDS患者SDF-1/CXCR4系統(tǒng)存在異常,檢測(cè)SDF-1a水平可能有助于MDS的診斷、判斷其預(yù)后,并為治療MDS提供新思路。 (2)人成骨細(xì)胞系hFOB1.19可能是處于較早階段的成骨祖細(xì)胞,表達(dá)多種造血相關(guān)的生長(zhǎng)因子,成骨細(xì)胞可能對(duì)骨髓正常造血具有重要的調(diào)控作用。 (

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