經(jīng)口感染弓形蟲小鼠小腸IgA分泌細胞及抗體水平動態(tài)變化.pdf

1、目的:觀察經(jīng)口感染弓形蟲速殖子在小鼠小腸組織、實質(zhì)器官內(nèi)的動態(tài)分布，探討弓形蟲病的機制；動態(tài)觀察弓形蟲速殖子經(jīng)口感染小鼠誘導IgA分泌細胞及抗體應答，分析兩者的相關(guān)性，探討IgA分泌細胞在抗弓形蟲感染的黏膜免疫應答中的可能作用；觀察STAg鼻內(nèi)免疫小鼠誘導的小腸抗體分泌細胞及抗體水平動態(tài)變化，探討STAg鼻內(nèi)免疫對小鼠小腸黏膜不同部位IgA分泌細胞在抗弓形蟲感染的黏膜免疫反應過程中的作用。 方法:BALB/c小鼠96只，隨機選取

2、12只用0.5ml/只PBS灌胃(對照組)，其余小鼠用RH株弓形蟲速殖子1×104個灌胃感染，分別于感染后2d、4d、6d、8d、10d、12d、14d隨機處死12只，取十二指腸、空腸、回腸、肝臟、脾、腎、肺、心和腦做組織印片，吉-瑞氏染色，鏡檢；免疫組化檢測十二指腸、空腸和回腸黏膜中IgA分泌細胞數(shù)量變化，ELISA法測定小腸液IgA及血清IgG、IgA水平。 5～6周齡BABL/c小鼠96只，隨機分為免疫組和對照組。免疫組用

3、弓形蟲可溶性速殖子抗原(STAg)20μg/只滴鼻免疫2次，間隔2周；對照組用20μl PBS代替。末次免疫后1周，灌胃攻擊感染弓形蟲速殖子1×104個/只。觀察小鼠發(fā)病情況，于感染后6d、7d、8d、9d、10d和11d，分別頸椎脫臼處死免疫組和對照組小鼠各8只。免疫組化檢測小腸不同部位黏膜中IgA分泌細胞；ELISA法測定血清IgG、IgA及腸液IgA水平。 結(jié)果:感染后2d在十二指腸、空腸、回腸、肺和心，4d在脾，6d在腎

4、和肝臟發(fā)現(xiàn)蟲體，腦內(nèi)未發(fā)現(xiàn)蟲體。十二指腸、空腸、回腸組織內(nèi)蟲體數(shù)量呈上升趨勢，第6d達高峰后稍有下降。肝內(nèi)蟲體數(shù)量呈上升趨勢，第6d最多；脾內(nèi)蟲體數(shù)量在6d達峰值后保持較高水平；實驗期間腎、肺和心內(nèi)蟲體數(shù)量保持較低水平階段。 小腸IgA分泌細胞分布于小腸黏膜的固有層中，不同腸段IgA分泌細胞數(shù)量的變化規(guī)律各異。十二指腸黏膜IgA分泌細胞數(shù)量隨感染后時間的推移，呈上升趨勢?？漳c黏膜的IgA分泌細胞數(shù)量在感染后2～8d升高，隨后下降

5、，至14d下降到感染前水平?；啬c黏膜IgA分泌細胞數(shù)量在感染后2～6d升高，隨后下降，至12d下降到低于感染前水平。感染后，小腸液IgA水平持續(xù)增高，血清IgA無變化IgG呈增高趨勢。十二指腸、空腸和回腸黏膜的IgA分泌細胞數(shù)量與小腸液IgA的相關(guān)性分別為r=0.732(P<0.001)、r=0.116(P=0.455)和r=0.429(P<0.005)。 STAg鼻內(nèi)免疫小鼠后小腸IgA分泌細胞量變化規(guī)律為：在十二指腸黏膜內(nèi)隨

6、感染天數(shù)增加逐漸增高；在空腸和回腸黏膜內(nèi)隨感染天數(shù)增加先上升后下降，對照組回腸黏膜內(nèi)11d低于6d，其它11d都高于6d；免疫組始終高于對照組，但無統(tǒng)計學差異。小腸沖洗液IgA在第7d降低，之后免疫組緩緩上升，對照組趨于平穩(wěn)；血清IgA先下降后上升之后又下降；血清IgG趨勢穩(wěn)定；免疫組始終高于對照組，各項指標組內(nèi)比較均無統(tǒng)計學差異，組間比較差異顯著(P＜0.05)。 結(jié)論:弓形蟲經(jīng)口感染小鼠后2d，小腸組織出現(xiàn)大量速殖子：同時肺