抗病轉(zhuǎn)錄因子與復(fù)制酶基因共轉(zhuǎn)化小麥及抗逆基因克隆.pdf

1、轉(zhuǎn)錄因子在信號的傳遞、相關(guān)功能基因的表達(dá)及調(diào)控中起著重要的作用，ERF轉(zhuǎn)錄因子通過與GCC元件的互作參與抗病、抗逆等應(yīng)答響應(yīng)，DREB轉(zhuǎn)錄因子通過結(jié)合DRE/CRT元件參與非生物脅迫響應(yīng)。本試驗利用基因槍介導(dǎo)技術(shù)將具有廣譜抗病性的小麥ERF轉(zhuǎn)錄因子與小麥黃花葉病毒的復(fù)制酶基因?qū)胄←湥@得具有綜合抗病性的小麥新材料。同時，克隆抗逆相關(guān)的DREB轉(zhuǎn)錄因子，為利用基因工程技術(shù)改良作物抗逆性奠定基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下： 1．對揚麥158轉(zhuǎn)

2、小麥黃花葉病毒復(fù)制酶基因Nib8的T<,6>代材料進(jìn)行了分子檢測，證明Nib8基因在T<,6>代轉(zhuǎn)基因小麥中依然穩(wěn)定遺傳，且抗病性繼續(xù)保持高抗。 2．將Nib8和具有廣譜抗病性的ERF基因W17分別構(gòu)建到單子葉高效組成型表達(dá)載體上，采用基因槍共轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化到小麥品種揚麥12和揚麥16中，共獲得Nib8基因的陽性轉(zhuǎn)基因植株42株、W17基因的陽性轉(zhuǎn)基因植株48株、2個功能基因均為陽性的轉(zhuǎn)基因植株6株。 3．將W17和選擇標(biāo)記

3、基因Bar分別構(gòu)建到單子葉高效組成型表達(dá)載體上，采用基因槍共轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化到大面積推廣小麥品種揚麥12和揚麥16中，共獲得W17基因的陽性轉(zhuǎn)基因植株22株。 4．通過電子克隆的方法得到39個DREB轉(zhuǎn)錄因子基因片段，氨基酸同源進(jìn)化分析將這39個序列分為4個家族；選取10個DREB轉(zhuǎn)錄因子，對其表達(dá)特異性進(jìn)行系統(tǒng)分析結(jié)果表明，這10個DREB基因都受鹽、低溫、干旱脅迫誘導(dǎo)，其中8個對ABA也有響應(yīng)：組織特異性表達(dá)分析顯示，大多數(shù)基因表