檉柳Lea基因抗重金屬功能及與elF5A共轉化山新楊的研究.pdf

1、Lea和eIF5A都是參與了植物的抗逆脅迫。我們已經(jīng)在檉柳中分別克隆到了Lea和eIF5A基因。在此基礎上,擬對Lea基因的抗重金屬能力以及Lea和eIF5A基因共轉化山新楊進行研究。首先,利用實時定量RT-PCR技術研究了不同脅迫條件下Lea基因在檉柳中的時序表達模式。結果表明,Lea基因能夠應答NaCl、ZnCl2、CdCl2以及CuSO4脅迫。亞細胞定位的結果表明,Lea-GFP蛋白定位于細胞質(zhì)和細胞核。
　　 為驗證Le

2、a基因對重金屬脅迫的抗性,選取本實驗室已經(jīng)轉入Lea基因山新楊4個株系和非轉基因山新楊對照株系(WT),轉基因株系分別為1-4號。對這5個株系組培苗進行了CdCl2脅迫試驗,從生長情況來看1號和2號抗性較強。選擇1號、2號和非轉基因山新楊進行脅迫分析逆境脅迫條件下非轉基因植株和這些轉基因植株的SOD活性、丙二醛(MDA)含量、POD活性、脯氨酸含量、可溶性蛋白含量等指標的變化。結果表明:脅迫7天后,轉Lea基因山新楊株系的SOD活性、P

3、OD活性、脯氨酸含量要高于非轉基因山新楊株系,而MDA含量以及可溶性糖含量要低于非轉基因山新楊株系。這說明Lea基因可能通過調(diào)控增強植物體內(nèi)活性氧清除能力、增加脯氨酸含量,調(diào)控可溶性蛋白的合成來提高植物對鹽脅迫耐受能力。
　　 將Lea和eIF5A基因構建到植物表達載體pROKⅡ中,形成重組質(zhì)粒pROKⅡ-Lea-eIF5A。通過農(nóng)桿菌介導的山新楊的遺傳轉化,使兩個外源基因整合到山新楊基因組中。獲得了14個卡那霉素抗性株系,對轉