小麥葉黃素合成關(guān)鍵酶基因ε-LCY的克隆及遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、小麥?zhǔn)鞘澜缟峡偖a(chǎn)量第二的糧食作物,提高其營養(yǎng)品質(zhì)是小麥遺傳育種研究的重要目標(biāo)之一。類胡蘿卜素作為人類飲食結(jié)構(gòu)中不可或缺的重要成分,不同種類的類胡蘿卜素在人類健康中起著不同的生理作用。由于人體及動(dòng)物體內(nèi)無法合成類胡蘿卜素,必須通過外界攝入膳食來供給,但普通小麥中類胡蘿卜素的含量相對較低(4μg/g以下),所以如何提高小麥中類胡蘿卜素的含量顯得尤為重要。
　　葉黃素屬類胡蘿卜素類的一種,對人類的健康有重要的作用。它是構(gòu)成人眼視網(wǎng)膜黃斑

2、區(qū)域的主要色素。人類的眼睛有高含量的葉黃素,這種色素是人體內(nèi)無法合成的,必須靠攝入外源葉黃素來補(bǔ)充,缺乏這種物質(zhì)會(huì)導(dǎo)致失明。此外,葉黃素還具有抗氧化活性,有助于預(yù)防機(jī)體衰老引發(fā)的心血管硬化、冠心病和腫瘤疾病。它無毒、安全,具有優(yōu)異的生理功效,常常作為食品添加劑使用。
　　本研究根據(jù)已發(fā)表的小麥類胡蘿卜素合成途徑關(guān)鍵酶—番茄紅素ε環(huán)化酶(ε-LCY)的基因全序列(GenBank編號(hào):EU649786.1),采用RT-PCR技術(shù)分離克

3、隆了其開放閱讀框全長cDNA序列1,611bp,其編碼的酶蛋白含有536個(gè)氨基酸殘基。
　　將ε-LCY基因編碼框序列正向插入到質(zhì)粒pAHC25的泛素廣譜表達(dá)啟動(dòng)子與Nos終止子之間,成功構(gòu)建了小麥過表達(dá)載體pAHC25-ε-LCY。進(jìn)而用基因槍法將pAHC25-ε-LCY載體導(dǎo)入到小麥的幼胚中,經(jīng)組織培養(yǎng)獲得轉(zhuǎn)基因植株后,提取小麥葉片DNA由PCR鑒定共得到了16株陽性轉(zhuǎn)基因材料。
　　本研究通過基因工程技術(shù)成功獲得的轉(zhuǎn)ε