小麥WRKY基因的克隆、表達分析及其遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、WRKY轉(zhuǎn)錄因子是植物轉(zhuǎn)錄調(diào)控子家族成員之一，它可以特異地與W-box的結(jié)合，并調(diào)控啟動子中含W-box元件的抗病、損傷、衰老相關(guān)基因的表達，進而廣泛參與植物對生物脅迫和非生物脅迫的響應(yīng)。
　　 本研究首先利用植物WRKY蛋白的保守序列在小麥基因組數(shù)據(jù)庫中搜索出大量高相似性的ESTs，并拼接獲得多條全長序列。通過設(shè)計特異引物，采用PCR技術(shù)成功克隆到一條小麥WRKY基因的cDNA全長序列。對該基因的序列比對結(jié)果顯示：它與小麥的T

2、aWRKY53a和TaWRKY53b的序列有較高的相似度，說明此基因確實為小麥中的WRKY基因，并命名為TaWRKY53c。進而對其進行生物信息學分析發(fā)現(xiàn)，TaWRKY53c蛋白具有兩個完整的WRKY結(jié)構(gòu)域和鋅指結(jié)構(gòu)，屬于典型的WRKY轉(zhuǎn)錄因子Ⅰ類成員。且在與擬南芥Ⅰ類WRKY蛋白的多序列比對中發(fā)現(xiàn)，該蛋白與AtWRKY33親緣進化關(guān)系較近，文獻報道AtWRKY33參與擬南芥的抗鹽響應(yīng)，因此認為它在小麥中可能參與該蛋白相似的信號通路。小

3、麥幼苗經(jīng)高鹽脅迫處理后，TaWRKY53c表達的組織及時空特異性的熒光定量PCR分析結(jié)果表明，該基因確實參與對高鹽脅迫的響應(yīng)，且短時間內(nèi)表達量增加九倍，并且在葉片中的表達量最高。
　　 為獲得具有抗鹽特性的轉(zhuǎn)基因小麥品種，構(gòu)建了TaWRKY53c的過表達載體，并利用基因槍技術(shù)將其轉(zhuǎn)化到小麥盾片中。再通過組織培養(yǎng)，獲得了大量再生植株，以備后續(xù)轉(zhuǎn)基因植株篩選。
　　 本論文的研究結(jié)果對闡明小麥中TaWRKY53c基因的生物學