小麥WRKY基因的克隆及其在逆境脅迫反應(yīng)下的表達(dá)變化.pdf

1、WRKY轉(zhuǎn)錄因子最初是從白薯中分離到的一類(lèi)DNA結(jié)合蛋白，含有約60個(gè)高度保守的氨基酸序列，能與(T)TGAC(C/T)序列（又稱(chēng)W-box）特異性結(jié)合，從而通過(guò)調(diào)控啟動(dòng)子中含W-box元件的抗病、損傷、衰老相關(guān)基因的表達(dá)，廣泛參與植物的生長(zhǎng)發(fā)育、激素反應(yīng)、代謝調(diào)節(jié)、逆境脅迫反應(yīng)以及防御反應(yīng)等生理生化過(guò)程。然而，目前有關(guān)在小麥中WRKY轉(zhuǎn)錄因子基因克隆和功能分析的研究少見(jiàn)報(bào)道。我們利用WRKY的高度保守結(jié)構(gòu)域，對(duì)小麥的EST數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行搜

2、索，并通過(guò)電子拼接的方法得到23條WRKY Unigenes，分別命名為T(mén)aWRKY1～TaWRKY23。應(yīng)用RT-PCR技術(shù)，克隆得到TaWRKY1的ORF序列，該序列編碼的多肽含一個(gè)WRKY結(jié)構(gòu)域和鋅指結(jié)構(gòu)，經(jīng)過(guò)系統(tǒng)發(fā)育分析應(yīng)屬于WRKY家族第II類(lèi)第c亞類(lèi)。我們根據(jù)TaWRKY1基因3’端非翻譯區(qū)序列設(shè)計(jì)了一對(duì)特異引物，利用半定量RT-PCR技術(shù)，對(duì)TaWRKY1組織特異性以及在低溫、鹽和PEG脅迫下的表達(dá)變化進(jìn)行了分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)

3、，TaWRKY1在葉中表達(dá)量最多，莖中次之，根中表達(dá)量最低，經(jīng)4 ℃ 1 h 低溫處理，TaWRKY1表達(dá)量即迅速上調(diào)，隨后又恢復(fù)到正常水平，而在鹽和PEG脅迫下，TaWRKY1的表達(dá)無(wú)明顯變化變化。這一結(jié)果表明，TaWRKY1可能是小麥對(duì)低溫這一逆境脅迫因子反應(yīng)信號(hào)途徑中的一個(gè)特異因子。本文的研究結(jié)果有助于闡明植物WRKY蛋白家族表達(dá)調(diào)控機(jī)制及其生物學(xué)功能，同時(shí)也為克隆小麥這種擁有復(fù)雜基因組生物中的新基因提供了一種有價(jià)值的參考，并且為