甜菜蔗糖磷酸合酶基因的克隆、表達(dá)及其遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、甜菜是重要的經(jīng)濟(jì)作物，蔗糖合成效率的高低是評判甜菜品種好壞的標(biāo)準(zhǔn)之一，因此，研究與蔗糖合成相關(guān)的酶也是非常必要的。蔗糖磷酸合酶(SPS)是植物蔗糖合成的關(guān)鍵酶，它在調(diào)控光合產(chǎn)物的最終分配、促進(jìn)庫細(xì)胞中蔗糖的積累方面具有重要的作用。本研究從以下幾方面開展對蔗糖磷酸合酶基因的研究。
　　 1. RT-PCR克隆得到甜菜蔗糖磷酸合酶基因(BvSPS1)的克隆，對該基因的序列分析表明：BvSPS1開放閱讀框全長3138 bp，編碼104

2、5個氨基酸，所推導(dǎo)的蛋白質(zhì)分子量為118 kDa，所推測的BvSPS1氨基酸序列跨膜區(qū)域位于第561-593位氨基酸之間。與釀酒葡萄(Vitis vinifera)的序列同源性是75.45%、煙草（Nicotiana tabacum)為74.59%。
　　 2. 利用半定量RT-PCR分析了BvSPS1基因在甜菜中的表達(dá)，結(jié)果顯示，該基因在根部的表達(dá)水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于葉柄及葉，表達(dá)方式屬于組織特異性表達(dá)。對甜菜各部位的SPS酶活性分析

3、同樣表明該酶在根部的活性高于其它部位。葡萄糖及蔗糖對BvSPS1基因的表達(dá)產(chǎn)生不同的影響，葡萄糖能夠強(qiáng)化BvSPS1基因的表達(dá)，且表達(dá)量與處理時間相關(guān)。
　　 3. 建立了甜菜的遺傳轉(zhuǎn)化體系，研究結(jié)果表明葉柄的再生能力較強(qiáng)，甜菜葉柄在6-BA 1.0 mg/L與IAA 0.3 mg/L激素組合的培養(yǎng)基上，再生率較高，均提高至約14.0%。利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)方法將BvSPS1基因?qū)胩鸩?，并獲得了轉(zhuǎn)基因植株，PCR結(jié)果為陽性。