小麥TaWRKY12基因的克隆、表達(dá)分析及其遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、WRKY蛋白是植物中的一類轉(zhuǎn)錄因子家族,它們通過特異性結(jié)合到靶標(biāo)基因啟動(dòng)子中的W-box元件啟動(dòng)基因表達(dá),在植物的生長(zhǎng)發(fā)育過程以及對(duì)內(nèi)外環(huán)境信號(hào)反應(yīng)中起重要作用。
　　小麥?zhǔn)且环N重要的糧食作物,各種非生物脅迫,如干旱、冷凍和高鹽等嚴(yán)重影響小麥的產(chǎn)量與品質(zhì)。由于小麥?zhǔn)钱愒戳扼w,其基因組結(jié)構(gòu)非常復(fù)雜。目前,小麥中有關(guān)WRKY基因及其功能的研究報(bào)道相對(duì)較少。為了研究小麥中WRKY蛋白對(duì)逆境脅迫的響應(yīng),我們?cè)谏镄畔W(xué)分析的基礎(chǔ)上,利用

2、RT-PCR技術(shù)從小麥幼苗cDNA中克隆了一個(gè)WRKY基因。基因序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)該基因與大麥中的HvWRKY12基因有非常高的同源性,因此命名該基因?yàn)門aWRKY12。該基因編碼的WRKY蛋白含有一個(gè)保守的WRKY結(jié)構(gòu)域,鋅指結(jié)構(gòu)類型為C2H2型,屬于Ⅱ類WRKY蛋白。利用半定量RT-PCR技術(shù)研究了TaWRKY12基因組織表達(dá)特異性,結(jié)果表明,該基因在小麥根組織中有較高水平的表達(dá),而在莖組織中表達(dá)相對(duì)較低,在葉片中的表達(dá)量最低。為了研究T

3、aWRKY12基因在非生物脅迫下的調(diào)控機(jī)制,我們對(duì)小麥幼苗進(jìn)行了PEG-6000(20％)、NaCl(100mM)、ABA(100μM)以及低溫(4℃)等脅迫處理,半定量RT-PCR分析結(jié)果顯示,在上述各種處理中,高鹽脅迫能特異上調(diào)TaWRKY12基因的表達(dá),說明TaWRKY12在小麥響應(yīng)鹽脅迫反應(yīng)中起重要作用。
　　為進(jìn)一步研究該基因在鹽脅迫中的作用,我們構(gòu)建了TaWRKY12基因過表達(dá)載體,通過基因槍轟擊方法將其轉(zhuǎn)化到鄭麥90