丹參micoR828全長(zhǎng)基因的克隆、表達(dá)分析及遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、丹參(Salvia miltiorrhiza Bunge)是一種重要的傳統(tǒng)中藥材，為唇形科鼠尾草屬多年生草本植物，以根入藥，味苦，性微寒，具有清心除煩、養(yǎng)血安神、活血調(diào)經(jīng)、祛瘀止痛等功效，其廣泛分布在華東、華北、中南、西北，西南部分省區(qū)也有分布。
　　 microRNA(miRNA)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的廣泛存在于真核生物中的一類非編碼、內(nèi)源性的小分子量RNA，長(zhǎng)度一般為20-25nt，自身不含有開放閱讀框(ORF)，是一類負(fù)調(diào)控因子。

2、它通過與靶RNA特點(diǎn)位點(diǎn)以完全互補(bǔ)或幾乎完全互補(bǔ)方式結(jié)合來(lái)切割降解靶RNA或抑制靶RNA的翻譯，從而來(lái)調(diào)控生物的生理過程。miRNA在植物中主要通過切割降解靶RNA來(lái)調(diào)節(jié)植物的生長(zhǎng)發(fā)育、形態(tài)建成、次生代謝等過程，它在植物體內(nèi)發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。近年來(lái)在一些植物中研究發(fā)現(xiàn)microR828(miR828)可靶向MYB基因。MYB是植物轉(zhuǎn)錄因子中最大的家族之一，它可參與植物的苯丙烷類次生代謝途徑的調(diào)節(jié)。該途徑是植物的主要3條次生代謝途徑之

3、一，這為研究miR828在丹參次生代謝過程的功能提供了一定的理論依據(jù)，也為丹參轉(zhuǎn)基因提供了新的基因資源。目前丹參野生資源在逐漸地減少，這對(duì)利用生物技術(shù)手段提高丹參的有效藥用活性成分具有重要的意義。
　　 本實(shí)驗(yàn)通過RACE技術(shù)克隆得到丹參MIR828基因，該基因全長(zhǎng)595bp，為單一外顯子。應(yīng)用SYBR Creen實(shí)時(shí)熒光定量PCR法分析了miR828前體與成熟體在四個(gè)器官中表達(dá)情況，結(jié)果顯示前體與成熟體在花中表達(dá)量都較根、莖、