白樺BpFLC基因的克隆及遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、開花植物從營養(yǎng)生長向生殖生長的轉(zhuǎn)變是由內(nèi)因和外因共同作用的結(jié)果。FLC是抑制花期轉(zhuǎn)變的關(guān)鍵因子，是多種調(diào)控途徑的作用因子。本文從白樺中分離出FLC基因，命名為BpFLC。對其進(jìn)行初步研究，主要結(jié)果如下:
　　1.從白樺葉片中的cDNA庫中分離BpFLC基因，其全長為1304bp，開放讀碼框?yàn)?27bp，共編碼208個(gè)氨基酸，推測其分子量為50.419kD，等電點(diǎn)為5.17。
　　2.通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法，對BpFLC

2、基因在不同器官中的表達(dá)模式進(jìn)行了分析。結(jié)果表明，BpFLC基因在不同的組織中均有表達(dá)，其中以莖尖和幼葉的表達(dá)較高，老葉和根中次之，莖段最低。
　　3.構(gòu)建了白樺BpFLC基因的亞細(xì)胞定位融合蛋白載體GFP-BpFLC，并將此載體轉(zhuǎn)化至洋蔥細(xì)胞中進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá)。結(jié)果表明，BpFLC基因定位于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)。
　　4.應(yīng)用染色體步移技術(shù)獲得BpFLC基因啟動(dòng)子，其全長為1647bp，具有啟動(dòng)子序列的典型特征，如TATA-box、C

3、AAT-box等，還含有一些重要的與開花相關(guān)的功能元件，如:WRKY71OS和GARE。
　　5.構(gòu)建了植物表達(dá)載體pROKⅡ-BpFLC，并經(jīng)農(nóng)桿菌介導(dǎo)進(jìn)行白樺遺傳轉(zhuǎn)化。通過PCR、Q-PCR、Nouthern雜交鑒定表明，BpFLC基因已經(jīng)整合到白樺基因組中，且轉(zhuǎn)基因植株的表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于野生型植株。
　　6.將植物表達(dá)載體pROKⅡ-BpFLC用浸花法對擬南芥進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化。通過PCR、RT-PCR、Nouthern雜交鑒