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文檔簡介
1、本論文成功克隆了耐旱植物沙冬青中的脫水素基因,構(gòu)建了植物表達(dá)載體并通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將其導(dǎo)入煙草中,獲得了PCR檢測陽性的轉(zhuǎn)基因植株,為研究脫水素基因在轉(zhuǎn)基因植物中的表達(dá)奠定基礎(chǔ)。主要研究內(nèi)容與結(jié)果如下: 1、根據(jù)沙冬青脫水素基因cDNA序列設(shè)計(jì)特異引物,以沙冬青基因組DNA為模板進(jìn)行特異性擴(kuò)增,成功克隆了該脫水素基因。該基因全長1106bp,沒有內(nèi)含子,開放閱讀框長552bp,5'UTR98bp,3'UTR456bp,編碼一條1
2、83個氨基酸的多肽。 2、利用含有BstEⅡ和BglⅡ限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)的特異引物從重組的克隆載體中PCR獲得目的片段,并將其定向插入到植物表達(dá)載體pCAMBIA3301的GUS表達(dá)區(qū),獲得重組表達(dá)載體pCAMBIA3301—DHN,通過凍融法將此表達(dá)載體導(dǎo)入農(nóng)桿菌LBA4404中,提取轉(zhuǎn)化質(zhì)粒,經(jīng)PCR鑒定表明脫水素基因植物表達(dá)載體構(gòu)建成功。 3、以煙草無菌苗葉片為轉(zhuǎn)化受體材料,用攜帶脫水素基因的表達(dá)載體的根癌農(nóng)桿菌進(jìn)行
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