楊樹SnRK基因克隆及遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf_第1頁(yè)
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1、蔗糖非發(fā)酵相關(guān)蛋白激酶SnRK(SNF1-related protein kinase)是一類絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，通過多種復(fù)雜的信號(hào)傳遞途徑對(duì)干旱、高鹽及低溫脅迫作出響應(yīng)，激發(fā)下游抗逆基因的表達(dá)，提高植物的抗逆性。本研究基于楊樹全基因組序列信息，克隆楊樹SnRK基因，并進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化研究。主要研究結(jié)果如下：
　　 1.根據(jù)已知的擬南芥，SRK2C基因序列，在楊樹基因組上定位并克隆獲得了3個(gè)SnRK基因，初步命名為PtSnRK-

2、1、PtSnRK-2和PtSnRK-3。序列分析結(jié)果表明3個(gè)基因的開放閱讀框(ORF)分別為1356bp、1329bp和1320bp，推測(cè)分別編碼451個(gè)、442個(gè)和439個(gè)氨基酸(aa)殘基的蛋白質(zhì)，分子量分別約為50.22Kda、49.22Kda和48.89Kda。3個(gè)PtSnRK基因均具有保守的Protein kinase結(jié)構(gòu)域和NAF結(jié)構(gòu)域。
　　 2.利用Gateway技術(shù)構(gòu)建了3個(gè)克隆基因的過量表達(dá)載體pH35GS:

3、:PtSnRK-1、pH35GS::PtSnRK-2和pH35GS::PtSnRK-3。經(jīng)農(nóng)桿菌介導(dǎo)將這3個(gè)基因轉(zhuǎn)入歐美雜種山楊T89和南林895楊，通過最適遺傳轉(zhuǎn)化條件及潮霉素篩選獲得了一批轉(zhuǎn)PtSnRK-1、PtSnRK-2和PtSnRK-3基因歐美雜種山楊T89和南林895楊植株，并對(duì)轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行了分子生物學(xué)鑒定和抗逆生理指標(biāo)檢測(cè)。
　　 3.PCR和實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明目的基因已經(jīng)整合進(jìn)楊樹基因組并超量表達(dá)

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