植物甾醇合成關鍵酶基因OsSQS遺傳轉化水稻的研究.pdf

1、植物甾醇(plant sterols)是植物細胞膜組成的必需成分之一，具有降膽固醇、抗癌、止咳等作用。在植物體內(nèi)，甾醇類化合物是通過角鯊烯以不同方式環(huán)合形成的，角鯊烯則是由類異戊二烯代謝途徑的產(chǎn)物法尼基二磷酸(FPP)在角鯊烯合成酶(SQS)的催化作用下合成的。因此，角鯊烯的合成是從類異戊二烯代謝途徑進入甾醇類合成代謝的分支點，角鯊烯合成酶(SQS)則是甾醇類合成代謝分支點的關鍵酶。本研究將含有角鯊烯合成酶基因(OsSQS)的雙T—DN

2、A植物表達載體，遺傳轉化到稻谷產(chǎn)量高、甾醇含量較低的優(yōu)質水稻品種“T—9”中，使其在水稻的胚乳中特異性高效表達，期望創(chuàng)建出稻谷產(chǎn)量高且甾醇含量較高的水稻品種。
　　 主要研究結果如下：
　　 1、目的基因克?。翰捎肞CR方法，從秈稻品種“IR30”中克隆出植物甾醇合成關鍵酶基因OsSQS的開放閱讀框(1212bp)，編碼403個氨基酸。
　　 2、構建含有OsSQS基因的雙T—DNA植物表達載體“pCDMAR—S

3、QS—hpt”：采用雙T—DNA共轉化的安全性轉基因策略，將選擇標記基因hpt和OsSQS基因分別構建在同一載體上兩個不同的T—DNA區(qū)，一個T—DNA區(qū)含有選擇標記基因hpt，另一個T—DNA區(qū)則含有OsSQS基因，選用能使基因在水稻胚乳中特異性高效表達的pGt1為啟動子，增強目的基因的表達。
　　 3、轉OsSQS基因水稻的獲得：利用農(nóng)桿菌介導法，將OsSQS基因導入優(yōu)質水稻品種“T—9”中，通過潮霉素抗性篩選，將抗性愈傷分

4、化成苗，共獲得203株潮霉素抗性植株。通過PCR檢測，共獲得含有OsSQS基因的植株25株。
　　 4、T0代轉基因種子β—谷甾醇含量測定：采用超聲波提取法，提取T0代轉基因種子中的β—谷甾醇，并通過紫外分光光度計法，測其含量。結果顯示：在21個樣品中有16個樣品β—谷甾醇含量均高于陰性對照，其中最高的含量達到0．054％，陰性對照為0．027％。
　　 5、T1代無標記轉基因水稻的篩選：通過PCR檢測，篩選出含有目的基