雙歧桿菌對實驗性末端回腸炎的保護作用及腸上皮細胞TLR2、TLR4的影響.pdf

1、目的:1.建立回腸-盲腸側(cè)側(cè)吻合術(shù)導(dǎo)致的的實驗性末端回腸炎動物模型以及雙歧桿菌干預(yù)模型,為下一步研究做準備。2.觀察發(fā)病過程中各組標本的炎癥變化,探討雙歧桿菌在發(fā)病過程中的作用。3.研究toll樣受體在雙歧桿菌干預(yù)下的表達。
　　方法:清潔級SD雄性大鼠100只,隨機分為A-E五組:正常對照組(A)、模型對照組(B)、雙岐桿菌低劑量干預(yù)組(C)、中劑量干預(yù)組(D)及高劑量干預(yù)組(E),每組20只。分別給B-E組大鼠行腹腔麻醉并回腸

2、末端-盲腸側(cè)側(cè)吻合術(shù)、A組只作處理腹腔麻醉處理。造模開始的同時,C-E組大鼠每日分別予以雙歧桿菌106cfu/ml、108cfu/ml、1010cfu/ml菌懸液各1ml灌胃處理,A、B兩組予以等量10％脫脂乳灌胃1ml作為對照,期間觀察術(shù)后動物的一般狀態(tài)。手術(shù)后第2、8周分批處死動物,取距吻合口1-3cm處末端回腸組織,行蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin staining, HE)染色觀察這五組大鼠末端回腸的炎癥情況,

3、行肉眼評分及鏡下腸組織病理學(xué)評分(histopathological score,HS)。使用免疫組化法檢測各組末端回腸粘膜中TLR2、TLR4的表達。
　　結(jié)果:
　　1、實驗動物的一般情況術(shù)后3-5天,模型對照組與雙歧桿菌干預(yù)組動物均出現(xiàn)一般狀況差,體重下降,模型對照組術(shù)后2周左右恢復(fù),而雙歧桿菌治療組一般于術(shù)后6-8天便恢復(fù),各時期的體重下降有統(tǒng)計學(xué)差異( P<0.05)。各組死亡率差異無顯著性(P>0.05)。

4、>　　2、末端回腸組織肉眼組織病理學(xué)評分:2周時模型對照組與雙歧桿菌治療組末端回腸組織肉眼觀均出現(xiàn)急性炎癥表現(xiàn),但模型對照組炎癥較雙歧桿菌干預(yù)組重,評分有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05),雙歧桿菌治療組隨著灌胃劑量的增大,炎癥程度逐漸減輕,三組評分有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。第8周時,模型對照組炎癥最為明顯,而雙歧桿菌治療組2周時炎癥反應(yīng)最為明顯,8周時雙歧桿菌治療組隨著灌胃劑量的增大,炎癥程度逐漸減輕,三組評分有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)

5、。
　　3、末端回腸組織光鏡下組織病理學(xué)評分:在造模2周后,B-E組回腸末端均出現(xiàn)急性炎癥表現(xiàn);與A組相比,B組的HS顯著增高(P<0.01); C、D組的HS均低于B組(P<0.05);E組的HS明顯低于B組(P<0.01)。隨著雙歧桿菌灌胃劑量的增加,C、D、E組炎癥程度依次減輕,三組評分有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。術(shù)后8周時B組為明顯的慢性炎癥反應(yīng)表現(xiàn),鏡下見大量炎性細胞浸及粘膜及粘膜下層,以淋巴細胞為主,粘膜部分出現(xiàn)脫落

6、、糜爛或淺潰瘍形成,淋巴管、乳糜管擴張,粘膜下結(jié)構(gòu)破壞,毛細血管增生。C、D、E干預(yù)組2周時炎癥最明顯,8周時炎癥明顯減輕。B組與C、D、E組及A組相比,差異有顯著性(P<0.05)。
　　4、末端回腸組織TLR2的表達:術(shù)后2周時模型對照組末端回腸組織TLR2平均吸光度(A)值顯著高于正常對照組(P<0.01);雙歧桿菌干預(yù)組TLR2的平均吸光度值低于B組(P<0.05)。8周時模型對照組TLR2的平均吸光度值高于正常對照組(P

7、<0.05);雙歧桿菌干預(yù)組 TLR2的平均吸光度值均低于模型對照組(P<0.05)。TLR2的平均吸光度值與鏡下組織病理學(xué)評分呈正相關(guān)(P<0.05)。
　　5、末端回腸組織TLR4的表達:術(shù)后2周時模型對照組末端回腸TLR4平均吸光度值明顯高于正常對照組(P<0.05);雙歧桿菌干預(yù)組TLR4的平均吸光度值均低于模型對照組(P<0.05)。術(shù)后8周時B組末端回腸組織TLR4平均吸光度值明顯高于A組(P<0.05);C、D、E干