丙丁酚對海馬神經(jīng)元缺氧-復氧損傷及oxLDL加重損傷的抑制作用.pdf

1、背景與目的：
　　引發(fā)缺血性腦血管疾病的病因很多，其中22％是由頸動脈粥樣硬化性狹窄所致，而大腦海馬是頸動脈粥樣硬化導致缺血性損傷的易發(fā)部位。頸動脈內膜剝脫術是臨床醫(yī)治頸動脈粥樣硬化性狹窄的經(jīng)典方法之一，但該手術常引起包括海馬組織在內的腦缺血-再灌注損傷，出現(xiàn)腦過度灌注綜合征。有資料表明oxLDL在缺血性腦血管疾病的發(fā)病過程中起重要作用，刺激細胞分泌炎性因子，誘生過氧化物，造成組織細胞損傷。而丙丁酚具有調節(jié)血脂，抗氧化及抗炎等作用

2、。本研究復制HT22海馬神經(jīng)元缺氧-復氧損傷模型以觀察oxLDL和丙丁酚對海馬神經(jīng)元缺氧-復氧損傷過程的影響，探討海馬缺血-再灌注損傷的可能機理以及抗氧化治療的應用前景。
　　方法與結果：
　　1.根據(jù)文獻自制密閉缺氧裝置，待HT22海馬神經(jīng)元融合度達80%后，放入缺氧裝置內，通入95%N2+5%CO2混合氣體造成缺氧6 h，之后復氧18 h，以復制 HT22海馬神經(jīng)元缺氧-復氧損傷模型。經(jīng)相關方法檢測，對照組神經(jīng)元胞體折光

3、性強，軸突樹突間連接緊密有序；缺氧24 h組胞體折光性，較缺氧6 h組明顯減弱，軸突樹突間聯(lián)系稀疏；凋亡形態(tài)的神經(jīng)元較多；MTT活力減弱1.2倍，而LDH活性則升高1.2倍。而缺氧-復氧組與對照組相比胞體折光性消失， 軸突樹突明顯中斷；強熒光顆粒的凋亡神經(jīng)元明顯增多；MTT活力減弱2倍， LDH活性則升高3.5倍；TLR2蛋白表達升高1.8倍；較缺氧24 h組凋亡神經(jīng)元也明顯增多；MTT活力降低1.3倍，LDH活性則升高1.2

4、倍；TLR2蛋白表達升高1.1倍。
　　2.將培養(yǎng)的HT22海馬神經(jīng)元分為3組，對照組：正常培養(yǎng)24 h+適量PBS；模型組：缺氧培養(yǎng)6 h+正常培養(yǎng)18 h+25μl PBS；oxLDL組：缺氧培養(yǎng)6 h+正常培養(yǎng)18 h+50mg/L oxLDL。處理完成后，經(jīng)相關方法檢測，HT22海馬神經(jīng)元缺氧-復氧損傷過程中，oxLDL組ROS生成和神經(jīng)元胞漿內紅色的脂滴明顯多于模型組；SOD活力較模型組降低1.3倍，HO-1蛋白表達量減

5、少1.5倍，而MDA含量則升高1.1倍；神經(jīng)元內膽固醇酯含量也升高1.5倍。
　　3.將培養(yǎng)的HT22海馬神經(jīng)元分為4組，其中模型組加入25μl PBS；丙丁酚組加入80μmol/L丙丁酚；oxLDL組加入50 mg/L oxLDL；丙丁酚+oxLDL組加入80μmol/L丙丁酚和50 mg/L oxLDL，缺氧培養(yǎng)6 h之后復氧18 h以誘發(fā)缺氧-復氧損傷，之后分別檢測相關指標。經(jīng)相關方法檢測，丙丁酚+oxLDL組神經(jīng)元胞體折光

6、性增強，軸突斷裂較少，較oxLDL組明顯好轉，凋亡形態(tài)的神經(jīng)元也明顯減少；MTT活力，較oxLDL組提升1.3倍，LDH活性減弱1.4倍；HO-1蛋白表達量，較 oxLDL組顯著增多，而 TLR2蛋白表達量顯著減少；總SOD活力較oxLDL組提升1.5倍，而MDA含量降低1.1倍；神經(jīng)元內膽固醇酯含量減少1.2倍；而且神經(jīng)元核內疊加后的NF-κB熒光明顯減弱；胞漿內紅色的脂滴亦明顯減少。
　　結論：
　　1、HT22海馬神經(jīng)

7、元缺氧-復氧損傷主要表現(xiàn)：神經(jīng)元折光性消失，軸突-樹突連接中斷；出現(xiàn)大量凋亡形態(tài)的神經(jīng)元；神經(jīng)元活力及功能顯著減弱；TLR2蛋白表達顯著升高。
　　2、HT22海馬神經(jīng)元缺氧-復氧損傷過程中，oxLDL引起神經(jīng)元ROS生成明顯增多；MDA含量增高，SOD活力降低；HO-1蛋白表達水平降低；神經(jīng)元內脂質蓄積，加重了海馬神經(jīng)元缺氧-復氧損傷。
　　3、丙丁酚對HT22海馬神經(jīng)元缺氧-復氧損傷及 oxLDL引起損傷加重具有抑制作用