子癇前期孕產(chǎn)婦胎盤組織中的氧化應(yīng)激對WAVE2表達的影響.pdf

1、目的:檢測正常孕產(chǎn)婦和子癇前期（PE）患者胎盤組織和血清中Wiscott-Aldrich綜合征蛋白家族富含脯氨酸同源蛋白2(WAVE2)的表達;測定兩組胎盤組織中活性氧(ROS)的水平，并分析ROS和WAVE2蛋白之間的相關(guān)性。另外，通過構(gòu)建體外滋養(yǎng)細胞氧化應(yīng)激模型探討氧化應(yīng)激與WAVE2之間的關(guān)系，并分析兩者在子癇前期發(fā)病過程中的作用。
　　 方法:(1)選擇2011年8月至2012年2月在重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院產(chǎn)科住院分娩

2、的20例子癇前期孕婦及正常足月產(chǎn)婦23例為研究對象;采用免疫組化鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連接(SP)法檢測WAVE2蛋白在PE組與正常對照組胎盤組織上的細胞定位;采用quantitative real-time PCR檢測兩組胎盤組織上WAVE2 mRNA的表達水平;采用蛋白印跡法檢(WB)測WAVE2蛋白在L組孕婦胎盤組織上的表達水平;此外，采用ELISA法檢測PE組與正常對照組孕婦血清中WAVE2的含量;采用組織勻漿法檢測兩組

3、產(chǎn)婦胎盤組織中ROS水平，并對胎盤組織中ROS水平與WAVE2蛋白表達水平進行相關(guān)性分析。(2)通過構(gòu)建體外滋養(yǎng)細胞缺氧/復氧(H/R)損傷模型，模擬缺血再灌注所誘導的氧化應(yīng)激損傷;人早孕絨毛外滋養(yǎng)細胞株HTR-8/SVneo細胞貼壁完全后分別置于常氧和H/R條件下48h，采用流式細胞儀分析細胞內(nèi)ROS的水平和細胞凋亡率;采用CCK8(CCK8)試劑盒檢測細胞增殖水平，并采用transwell侵襲實驗和遷移實驗分別檢測細胞遷移侵襲狀況;

4、利用細胞免疫熒光法和蛋白印跡法檢測HTR-8/SVneo細胞內(nèi)WAVE2蛋白的定位及表達水平的變化;最后利用ELISA檢測HTR-8/SVneo細胞上清液中WAVE2蛋白含量的改變。
　　 結(jié)果:(1) WAVE2蛋白主要定位于胎盤滋養(yǎng)層細胞和血管內(nèi)皮細胞的胞漿中，子癇前期胎盤滋養(yǎng)細胞上的陽性染色較正常對照組弱。PE組胎盤組織中WAVE2 mRNA表達水平明顯低于正常對照組（0.28±0.07vs1.01±0.02），差異有統(tǒng)計

5、學意義。PE組胎盤組織中WAVE2蛋白表達水平為0.63±0.08，明顯低于正常對照組的1.34±0.19，差異有統(tǒng)計學意義;PE組和正常對照組產(chǎn)婦血清中WAVE2含量分別是（0.62±0.09）ng/ml和（1.08±0.12）ng/ml，差異有顯著性。PE組胎盤組織中ROS水平為（144.2±12.3）nmol.mg-1.prot-1，正常對照組胎盤組織中ROS水平為（75.2±8.7）nmol.mg-1.prot-1，PE組胎盤組

6、織中ROS水平明顯高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義。此外，PE組胎盤組織中ROS水平與WAVE2蛋白表達水平呈顯著負相關(guān)。(2)缺氧復氧處理可導致HTR-8/SVneo細胞內(nèi)的ROS水平顯著升高以及WAVE2蛋白表達顯著降低，細胞上清液中WAVE2的含量比起對照組也顯著降低[(0.29±0.05)ng/ml vs(0.68±0.08) ng/ml，P＜0.05];還可導致HTR-8/SVneo細胞過度凋亡、增殖抑制以及遷移侵襲力減弱，差