游離脂肪酸對(duì)小鼠胰島β細(xì)胞株NIT-1細(xì)胞凋亡及功能的影響.pdf

1、目的:研究不同濃度的游離脂肪酸(free fatty acids,FFA)的不同作用時(shí)間對(duì)小鼠胰島β細(xì)胞株NIT-1細(xì)胞凋亡及功能產(chǎn)生的影響。以期進(jìn)一步分析FFA水平異常介導(dǎo)β細(xì)胞損害的機(jī)制,為糖脂代謝紊亂患者的治療提供參考。
　　方法:以小鼠的胰島β細(xì)胞株NIT-1為研究對(duì)象,在PRMI1640培養(yǎng)液中加入含10％小牛血清、100 U/ml青霉素、100 mg/L鏈霉素,置于5%CO2、37℃恒溫恒濕培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。在倒置相光

2、學(xué)顯微鏡下觀察培養(yǎng)瓶中的胰島β細(xì)胞株NIT-1細(xì)胞的生長(zhǎng)情況;繪制生長(zhǎng)曲線,取對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的細(xì)胞分為實(shí)驗(yàn)組、FFA0.25mmol/l組、FFA0.5mmol/l組、FFA1.0mmol/l組。采用MTT比色法檢測(cè)不同濃度FFA及不同作用時(shí)間(24h,48h,72h)干預(yù)后各組細(xì)胞OD值,計(jì)算胰島β細(xì)胞株NIT-1細(xì)胞的增殖抑制率;采用免疫熒光染色法檢測(cè)凋亡細(xì)胞的形態(tài),應(yīng)用熒光顯微鏡(Olympus,日本)觀察細(xì)胞凋亡情況;采用放射免疫分

3、析法檢測(cè)各組胰島β細(xì)胞株NIT-1細(xì)胞培養(yǎng)基中的胰島素水平,了解細(xì)胞功能。所有數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。各指標(biāo)以x±s表示,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組組間均數(shù)比較,所得結(jié)果用方差分析、兩樣本t檢驗(yàn)及配對(duì)樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:①采用MTT法測(cè)定各組細(xì)胞OD值,與對(duì)照組比較,FFA0.25 mmol/L誘導(dǎo)24 h后的細(xì)胞增殖活性無明顯降低(P>0.05),0.5 mmol/L和1

4、mmol/L FFA誘導(dǎo)24 h后的細(xì)胞增殖活性明顯降低(P<0.05),不同濃度FFA誘導(dǎo)48,72h后的細(xì)胞增殖活性與對(duì)照組比較均明顯降低,細(xì)胞增殖抑制率上升。②FFA對(duì)NIT-1細(xì)胞胰島素分泌功能的影響:對(duì)照組與FFA實(shí)驗(yàn)組分別培養(yǎng)24h、48h、72h收集各組細(xì)胞上清液,用放射免疫分析方法檢測(cè)各組胰島素值比較各組隨著濃度及作用時(shí)間的增加,胰島素水平隨之減少,甚至完全被抑制。③免疫熒光染色檢測(cè)凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)分析:熒光顯微鏡下可見

5、空白對(duì)照組細(xì)胞核形態(tài)為圓形或橢圓形,邊界清楚,FFA組出現(xiàn)凋亡細(xì)胞核變形,表現(xiàn)為核碎裂、固縮、核小體形成。
　　結(jié)論:①FFA干預(yù)后的βNIT-1細(xì)胞增殖抑制率隨FFA作用時(shí)間延長(zhǎng)、濃度增加而進(jìn)行性增加。FFA水平異常不利于胰島βNIT-1細(xì)胞生存。②FFA干預(yù)后的βNIT-1細(xì)胞的胰島素分泌水平隨FFA作用時(shí)間延長(zhǎng)、濃度增加而進(jìn)行性減少,FFA對(duì)于NIT-1細(xì)胞的胰島素分泌功能有明顯的時(shí)間和濃度依賴性?？烧T導(dǎo)βNIT-1細(xì)胞凋亡

6、,降低其分泌功能。③FFA干預(yù)后的βNIT-1細(xì)胞隨著作用濃度和時(shí)間的增加凋亡細(xì)胞比例增加。因此,脂代謝異?？擅黠@損害胰島β細(xì)胞的功能,及早干預(yù)血脂水平,消除脂毒性可作為糖尿病防治中的一項(xiàng)重要指標(biāo)。
　　意義:近年來2型糖尿病的脂毒性作用已日益受到重視。通過本實(shí)驗(yàn)我們可以看出,早期降脂治療,對(duì)改善胰島β細(xì)胞功能有著非常積極的作用和意義,及早干預(yù)血脂異常促進(jìn)的胰島β細(xì)胞凋亡,盡可能的保存細(xì)胞的胰島素分泌功能。糖尿病防治的長(zhǎng)遠(yuǎn)目標(biāo)應(yīng)在