支氣管哮喘氣道平滑肌細(xì)胞線粒體膜ATP敏感鉀通道對(duì)PKC信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑及細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的：
　　 探討線粒體ATP敏感鉀通道（mitoKATP）和線粒體膜電位（Δψm）在支氣管哮喘氣道平滑肌細(xì)胞中對(duì)PKCα信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑和細(xì)胞增殖的影響。
　　 方法：
　　 以SD大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，隨機(jī)將36只雄性大鼠平均分為正常組和哮喘組，以腹腔注射和霧化吸入卵白蛋白法制備大鼠哮喘模型。取大鼠氣道平滑肌細(xì)胞，分為六組進(jìn)行干預(yù)：A.正常對(duì)照組；B.正常+diazoxide（mitoKATP特異性開(kāi)放劑）組；C.正常

2、+5-HD（mitoKATP特異性阻斷劑）組；D.哮喘對(duì)照組；E.哮喘+diazoxide組；F.哮喘+5-HD組。以激光共聚焦顯微鏡成像法檢測(cè)線粒體膜電位；western blot法檢測(cè)細(xì)胞PKCα蛋白的表達(dá)；realtime PCR法檢測(cè)細(xì)胞PKCα mRNA的表達(dá)；MTT法檢測(cè)細(xì)胞的增殖情況，及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期。
　　 結(jié)果：
　　 （1）B組中R-123熒光明顯增強(qiáng)，PKCα蛋白表達(dá)量增高，PKCα mRN

3、A表達(dá)量增高，細(xì)胞增殖明顯增加，與A組比較，均有p<0.05；而C組與正常對(duì)照組相比較，上述指標(biāo)均無(wú)明顯變化。（2）D組與E組較A組R-123熒光明顯增強(qiáng)，PKCα蛋白與PKCα mRNA表達(dá)量增高，細(xì)胞增殖明顯增加(p<0.05)；其中E組上述指標(biāo)的增高較D組更顯著(p<0.05)。而哮喘氣道平滑肌細(xì)胞以5-HD干預(yù)24小時(shí)后，與哮喘對(duì)照組相比（即F組與D組相比），R-123熒光明顯減弱，PKCα蛋白與mRNA表達(dá)量降低，細(xì)胞增殖明顯