線粒體膜ATP敏感鉀通道對人哮喘氣道平滑肌細胞增殖和分泌的影響.pdf

1、目的：支氣管哮喘是一種嚴重威脅人類健康的疾病，它的特征是慢性氣道炎癥，氣道重構和氣道高反應性（AHR），其中氣道慢性炎癥被認為是哮喘的本質。以往觀點認為氣道平滑肌細胞在這個病理過程中只是作為被動的靶細胞，在炎癥介質的刺激下發(fā)生收縮和痙攣等反應。但是近年來的研究表明，氣道平滑肌細胞不僅具有收縮功能，而且還能發(fā)生表型轉化，在外界環(huán)境因素的刺激下從收縮型轉化為增殖型的合成表型，合成分泌多種炎癥因子和細胞因子，其中的具體機制十分復雜。在我們以往

2、的研究中發(fā)現(xiàn)哮喘可引起大鼠氣道平滑肌細胞的線粒體膜ATP敏感鉀通道開放，促進氣道平滑肌細胞增殖和表型轉化，參與氣道重構。但對于人支氣管氣道平滑肌細胞（HASMCs）方面的研究尚少見報道。故本實驗擬在我們以往研究的基礎上進一步探討線粒體膜ATP敏感鉀通道對人支氣管氣道平滑肌細胞增殖和分泌的影響，以期探索線粒體膜ATP敏感鉀通道通道在支氣管哮喘中的作用，為哮喘的防治尋找新的途徑。
　　 方法：采用手術室肺葉切除患者的肺組織，分離培養(yǎng)

3、正常人氣道平滑肌，用哮喘患者血清體外制成被動致敏的人哮喘氣道平滑肌細胞模型，取哮喘和正常HASMCs分為6組進行干預：正常對照組；正常+二氮嗪(Diazoxide，DE)（線粒體膜ATP敏感鉀通道的選擇性開放劑）組；正常+5-羥基癸酸鹽(5-hydroxydecanoate，5-HD)（線粒體膜ATP 敏感鉀通道的選擇性阻斷劑）組；哮喘對照組；哮喘+DE組；哮喘+5-HD組。利用羅丹明（R-123）熒光染色，激光共聚焦顯微鏡成像檢測線粒

4、體膜電位（△ψm），二氯熒光素雙醋酸鹽(DCFH-DA)熒光染色法檢測細胞內活性氧（ROS）含量，MTT 法檢測細胞增殖的情況，逆轉錄PCR檢測氣道平滑肌細胞中轉化生長因子β1（TGF-β1）mRNA的表達。
　　 結果：①正常+DE組與正常對照組相比，活性氧產(chǎn)生增多，△ψm 去極化，R-123熒光強度增強，細胞增殖增多，TGF-β１的表達增高（P＜0.05），而正常+5-HD組與正常對照組相比，上述指標無顯著差異；②與正常對照

5、組相比，哮喘組活性氧產(chǎn)生增多，△ψm 去極化，R-123 熒光強度增強，細胞增殖增多，TGF-β１的表達增高，哮喘+DE組與哮喘對照組相比，上述指標增強，哮喘+5-HD組與哮喘對照組相比，上述指標降低（P＜0.05）。
　　 結論：哮喘可引起人氣道平滑肌細胞線粒體膜ATP敏感鉀通道開放，使活性氧的產(chǎn)生增多，引起△ψm 去極化，促進人氣道平滑肌細胞的增殖和向合成表型的轉化，同時TGF-β1的表達也相應增加，因而從多個方面參與氣道重