ATP敏感性鉀通道對(duì)大鼠前脂肪細(xì)胞增殖分化影響及其機(jī)制.pdf

1、本研究分為二部分：
　　 第一部分：ATP敏感性鉀通道對(duì)大鼠前脂肪細(xì)胞增殖分化影響
　　 目的：探討ATP 敏感性鉀通道在大鼠前脂肪細(xì)胞增殖分化中作用。
　　 方法：逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測大鼠腦組織、脂肪組織、前脂肪細(xì)胞和誘導(dǎo)5天獲得的脂肪細(xì)胞中ATP 敏感性鉀通道磺脲類受體mRNA（SURmRNA)亞型，實(shí)時(shí)定量PCR檢測前脂肪細(xì)胞和誘導(dǎo)5天獲得的脂肪細(xì)胞中SURmRNA表達(dá)；ATP 敏感性鉀通道阻滯劑格列本脲和激動(dòng)

2、劑二氮嗪作用于前脂肪細(xì)胞，實(shí)時(shí)定量PCR檢測SURmRNA表達(dá)，MTT檢測前脂肪細(xì)胞增殖，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期分布；油紅O 染色法檢測細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)含量，Image-Pro plus5.0軟件測量細(xì)胞直徑。
　　 結(jié)果：大鼠腦組織中有SUR1mRNA、SUR2mRNA表達(dá)，大鼠脂肪組織、前脂肪細(xì)胞和誘導(dǎo)5天獲得的脂肪細(xì)胞中均有SUR2mRNA表達(dá)，而無SUR1mRNA表達(dá)，且脂肪細(xì)胞中SUR2mRNA表達(dá)明顯高于前脂肪細(xì)胞；格列本

3、脲抑制前脂肪細(xì)胞SUR2mRNA表達(dá)，呈劑量依賴性地促進(jìn)前脂肪細(xì)胞增殖，增加G2/M+S 期細(xì)胞百分率，增加細(xì)胞脂質(zhì)含量，使脂肪細(xì)胞直徑增大；二氮嗪在這些方面的作用與格列本脲相反。
　　 結(jié)論：ATP 敏感性鉀通道在前脂肪細(xì)胞增殖分化中可能起調(diào)節(jié)作用。
　　 第二部分：ATP敏感性鉀通道調(diào)節(jié)大鼠前脂肪細(xì)胞增殖分化機(jī)制研究
　　 目的：探索ATP 敏感性鉀通道調(diào)節(jié)大鼠前脂肪細(xì)胞增殖分化機(jī)制。
　　 方法：A

4、TP 敏感性鉀通道特異性激動(dòng)劑（二氮嗪）、阻滯劑（格列本脲）作用于前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化5天后，逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測瘦素mRNA表達(dá)及過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPAR γ）mRNA表達(dá)。二氮嗪、格列本脲作用于前脂肪細(xì)胞一天，Western blot檢測其細(xì)胞內(nèi)P21、P27 蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：前脂肪細(xì)胞分化過程中，二氮嗪組瘦素mRNA表達(dá)明顯增加（p<0.05），格列本脲組瘦素mRNA表達(dá)明顯降低（p<0.05）；格列本脲組